蛋白质工程学考试复习课件.pptVIP

一、蛋白质工程的概念 工程化：理念－设计－制造－功能实现 以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过化学、物理和分子生物学的手段进行基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类对生产和生活的需求。 1 蛋白质工程产生的标志 1982年，Winter等首次报道了通过定点诱变获得改性的酪氨酸tRNA合成酶(Nature,299,1982) 2 三、蛋白质工程的研究内容 以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过化学、物理和分子生物学的手段进行基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类对生产和生活的需求。 1. 蛋白质结构分析功能研究 ——基础（关系学） 2. 结构、功能的设计和预测 ——基础的应用与验证（实验科学） 3. 创造和/或改造蛋白质 ——终目标（工程学） 3 蛋白质工程的支撑技术 定点突变等遗传操作技术 蛋白质结构解析技术 生物信息学分析技术 蛋白质的设计、表达、生产技术 4 如何认识蛋白质？ 蛋白质家族（family） 一组进化上相关的蛋白质，这些蛋白质共享一个或多个结构域 蛋白质的物理性质 等电点、分子量、沉降系数、分子半径、跨膜区结构域等 蛋白质的细胞定位 在细胞中定位（cellular component） 蛋白质的生物功能 哪个生化过程中起作用（biological process），起怎样的分子功能（molecular function） 5 L-型的氨基酸 构型configuration：一个分子中原子的特定空间排布（L-型的单一手性分子） 构型转化时必须有共价键的断裂和重新形成 不同构型分子除镜面操作外不能以任何方式重合 化学上可以分离，不可由单键旋转相互转换 6 构象conformation：组成分子的原子或基团绕单键旋转而形成的不同空间排布 构象转化时不需要共价键的断裂和重新形成 化学上难以区分和分离 7 1.α-螺旋 结构（α-helix） 多肽链中的各个肽平面围绕同一轴旋转，形成螺旋结构. 莱纳斯·卡尔·鲍林 肽链内形成氢键，氢键的取向几乎与轴平行。 中心无空腔。 稳定 蛋白质分子为右手-螺旋。 8 β折叠的结构特点 氢键是在片层间而不是片层内形成。 9 在平行（a）和反平行（b）β－折叠片中氢键的排列 平行式构象：φ= -119O， ψ = ＋113O　反平行式：　φ= -139O， ψ = ＋135O 10 3.转角（turn) 3.1．β转角(-turn) 由四个AA组成; 第一个AA的 -C=O 和第四个AA的 –N-H 之间形成氢键 一个不很稳定的环状结构。 3.2．γ转角(γ-turn) 由3个AA构成的转角 11 四、维系蛋白质结构的作用力 肽键 二硫键 氢键 离子键 金属离子配位键 疏水键 范德华力 12 第二遗传密码 现有的遗传密码仅有从核酸序列到无结构的多肽链的信息传递，因此是不完整的。 无结构的多肽链到有完整结构的功能蛋白质信息传递部分—遗传密码的第二部分，即蛋白质中氨基酸序列与其三维结构的对应关系，称之为第二遗传密码或折叠密码 13 3.第二遗传密码的特点 简并性 氨基酸序列不同的肽链可以有极为相似甚至相同的三维结构。 多意性 相同的氨基酸序列可以在不同的条件下决定不同的三维结构。 全局性和复杂性 在肽链上相距很远的残基可以在空间上彼此靠近而相互作用，并对分子总体结构产生重要影响；后形成的肽段可以影响已经形成的肽段的构象从而造成对分子整体的影响等。 14 一、蛋白质和新生肽链折叠 新生肽链的折叠 不仅指肽链在空间的盘旋卷曲，而是包括广义的新生肽链的整个成熟过程，包括化学修饰、跨膜转运、亚基组装、水解激活等。 蛋白质的折叠(protein folding) 从体内新生的多肽链或体外变性的多肽链的一维线性氨基酸序列转化为具有特征三维结构的活性蛋白质的过程。 15 3.体外蛋白质折叠与细胞内新生肽链折叠的区别 完整肽链在试管内的重折叠相当于翻译完成后才折叠，与新生肽链的合成延伸与折叠同时进行不同。 细胞内新生肽链折叠是一个比蛋白质体外重折叠快得多的过程。 温度、浓度、pH值不同 细胞和试管另一个重要差别是“大分子拥挤”问题。 16 三、帮助蛋白质和新生肽链折叠的生物大分子 分子伴侣 （molecular chaperone） 折叠酶：催化与折叠直接有关的化学反应的酶。 蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase, PDI) 肽基脯氨酰顺反异构酶(peptidyl prolyl cis-trans isomerase, PPI) 17