利用SSH+技术鉴定黄瓜抗霜霉病相关基因推荐.pdfVIP

2014（1）：17-23 中 国 蔬 菜 研究论文 CHINA VEGETABLES 利用 SSH 技术鉴定黄瓜抗霜霉病相关基因 1，2 1* 1 1 1 刘大军 　秦智伟 　周秀艳 　辛　明 　武　涛 （东北农业大学园艺学院，黑龙江哈尔滨150030； 哈尔滨市农业科学院，黑龙江哈尔滨150070）1 2 摘　要：采用SSH技术对黄瓜抗霜霉病自交系M801-3-1侵染霜霉病菌前后的差异表达基因进行了研究。利用SSH技术构 建抗病黄瓜材料接种霜霉病菌和未接种差异表达的差减cDNA文库。经反向Northernblot杂交检测，共得到48个阳性克隆。 利用分子生物学软件对测序后的序列进行质量检测和聚类、拼接，共得到14个UniESTs，其中包括8个singletons和6个 contigs。通过SSH-EST代表基因功能的分析，说明抗氧化胁迫能力和叶绿体的重建和保护机制对抗病品种抗病有重要作用。 R 同时，提出SSH-EST代表的clpb、HSP70、HSP22和肽脯氨酰顺反异构酶还可能参与了 基因介导的防御反应，smHSP有 R 可能就是R蛋白的“保卫靶”，负责监测细胞内的异常，这一发现为揭示活性氧机制和 基因介导的防卫机制之间的关系提 供了关键证据。 关键词：黄瓜；霜霉病；SSH技术 黄瓜霜霉病是由卵菌纲的古巴假霜霉病菌 抑制性差减杂交（SSH）技术是由Diatchenko Pseudoperonospora cubensis （ ）引起的。黄瓜生产 等（1996）提出。Yang等（1999）将SSH技术与 中霜霉病是具有毁灭性的叶部病害，近年来随着病 微阵列筛选技术进行了有机结合，大大提高了鉴定 原菌的变异，有加速流行的趋势。Helena等（2011） 差别表达基因检测的效率。SSH技术现在已经成功 结合前人的研究对黄瓜霜霉病抗性遗传的相关问题 应用于抗病基因分离的研究。骆蒙（2001）构建了 进行了系统的论述（刘艳玲等，2009；李建武， 白粉病诱导小麦叶片的特异性差减文库，获得大量 2010）。人们已经对黄瓜霜霉病的发病过程十分了 EST序列，根据这些EST推测肌醇脂信号系统、 解（石延霞，2002；刘艳玲等，2009），利用药剂 SA信号系统、MAP相关信号传递系统可能参与小 防治已经可以在一定程度上控制该病的发生（朱书 麦白粉病过程。于秀梅（2006）构建了小麦接种条 生，2005；张晓，2008；乔桂双，2009），但药剂 锈菌后不同时间的cDNA文库，共获得652个抗病 的使用存在食品安全问题和环境问题，同时也存 相关基因和抗病信号转导相关的Unigenes。刘蕾等 在霜霉病菌的抗药性问题（刘晓宇，2004）。培育 （2012）构建了青枯菌侵染相关的抑制性差减杂 并使用抗病品种无疑是减轻该病危害的最有效措 交文库，筛选出44个差异表达基因，并利用基因 施（Brancaetal.，2005；李建武，2010；牛德， 敲出技术对差异表达进行功能验证。赵胡（2012） 2010）。因此，黄瓜抗霜霉病基因的发掘和黄瓜抗 构建了镉胁迫的SSH文库，分离出600个独立克 霜霉病机制的深入研究对于黄瓜抗霜霉病育种和黄 隆。Norelli等（2009）构建了苹果火疫病侵染前后 瓜生产实践具有重要意义。 的SSH文库，获得468个非冗余序列，并得出侵 染前后表达基因不同的结果。Verica等（2004）利 刘大军，男，博士