[理学]3基因工程.ppt

4目的蛋白的分离纯化 分子筛 亲和柱 离子交换 抗原抗体 目的蛋白 基因载体 目的基因 质粒 噬菌体 病毒 PCR cDNA 人工合成 基因文库 限制性内切酶 有切口的载体 有切口的目的基因 DNA连接酶 重组体 转化 转染 体外包装 带重组体的宿主细胞 表型筛选 电泳法 核酸杂交 免疫学方法 目的基因的表达 重组药物的生产 人类疾病相关基因的识别和鉴定 基因治疗 三 基因工程在医学中的应用 1 重组药物的生产 1.1 重组促生长素抑制素的合成 1.2重组胰岛素 1.3在大肠杆菌中合成人生长素 1.4重组凝血因子Ⅷ 1.5重组疫苗 1.1 重组促生长素抑制素的合成 lac启动子 lacZ’ 人工促生长素抑制素基因 met β-半乳糖苷酶片段 促生长素抑制素 融合蛋白 转化大肠杆菌 促生长素抑制素（14氨基酸） 溴化氰 1.2 重组胰岛素 胰岛素利于重组生产的两个特点： 一是翻译后不需要糖基化修饰，在细菌中合成的胰岛素具有完整的生物学功能； 二是胰岛素的分子量较小，由两条多肽 链组成，一条含21氨基酸，另一条含30个氨基酸。 胰岛素的分子结构和从前胰岛素原合成胰岛素的简要过程 30个氨基酸 B链 21个氨基酸 A链 胰岛素利于重组生产的特点 前导序列 B C A 前胰岛素原 （胰岛素原=BCA——无前导序列） 胰岛素 ∣ S ∣ S ∣ ∣ S ∣ S ∣ B A 剪切 -S-S- -S-S- L B A C 自发折叠 由人工合成的A,B链的基因合成重组胰岛素 lac启动子 lacZ’ A基因 运载人工合成的A基因的 载体 B基因 运载人工合成的B基因的 载体 (a)人工合成的基因 (b)合成胰岛素蛋白 A B met β-半乳糖苷酶片段 A链 胰岛素 纯化A链和B链 二硫键连接 met B链 溴化氰处理 pBR322 pBR322 转化的大肠杆菌合成AB融合蛋白 1.3 重组生长素的合成 密码子 0 191 191 24 24 0 24 HaeⅢ 保留 除去 （a）生长素cDNA片段的准备过程 （b）表达 0 24 合成前导序列 191 cDNA lac启动子 插入表达载体 合成生长素 转化大肠杆菌 1.4 凝血因子Ⅷ基因及其翻译产物 外显子（26） 内含子（25） （a）凝血因子Ⅷ基因 （b）凝血因子Ⅷ的翻译后的加工 初级翻译产物 （2351个氨基酸） A B C A C 成熟的凝血因子Ⅷ蛋白 加工 重组凝血因子Ⅷ合成的几种方法 在哺乳动物细胞中合成（仓鼠细胞） 利用活体动物生产（猪） 利用表达载体 Ag启动子 SV40聚腺甘酸化序列 凝血因子Ⅷ的cDNA 导入仓鼠细胞 重组蛋白 转基因动物作为生物发生器 利用分离的病毒壳体蛋白作疫苗的原理 分离的病毒壳体蛋白 壳体蛋白的 特异抗体 注射到血液循环 抗体包围整个病毒 被完整病毒感染 1.5重组疫苗 重组牛痘病毒可能用途的基本原理 乙型肝炎表面抗原基因 牛痘病毒启动子 重组牛痘病毒基因组 牛痘病毒 乙型肝炎病毒 抗乙型肝炎抗体 抗牛痘病毒抗体 注射重组牛痘病毒 颗粒到血液循环 免疫系统合成抗牛痘病毒 和乙型肝炎病毒的抗体 在重组牛痘病毒中表达的外源基因 基 因 恶性疟原虫表面抗原 流行性感冒病毒衣壳蛋白 狂犬病病毒G蛋白 乙型肝炎主要表面抗原 单纯疱疹糖蛋白 人类免疫缺陷病毒（HIV）表面蛋白 水泡性口炎衣壳蛋白 仙台病毒蛋白 转基因植物生产重组蛋白疫苗 HbsAg 麻疹病毒 呼吸道合胞病毒 集几种疫苗于一体 基因本身也是一个产业 Rockfeller 大学将人肥胖基因出售0.2亿美元（1995年3月） Amgen公司将FKBP神经免疫因子配体转让达3.29亿美元（1997年） Millennium公司以4.65亿美元向Bayer公司转让225种基因的开发权（1998年9月） 2 人类疾病相关基因的识别和鉴定 Φ基因的识别为治疗遗传性疾病提供生物化学基础， 并为进一步设计药物提供依据 Φ识别缺陷基因中发生的突变，用来设计筛选程序， 检测缺陷基因携带者的突变基因 Φ遗传疾病相关基因的识别是进行基因治疗的先决条件 两个紧密连锁的基因几乎总是一起传给下一代 连锁和非连锁基因的遗传形式 A B A B A B a b a b a b A B a b A B A b a b a b 重组产物 A B a b a b A B A b a B （a）连锁基因 （c）在不同染色体上的基因 （b）在同一染色体上相距很远的基因 在同一条染色体上，相距很远的两基因常常同时遗