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稀释、加样和涂布注意事项 适宜稀释度：根据标准或企业提供的信息选择稀释度。 系列稀释时不同的稀释度应更换吸管（移液管），加样和涂布不同稀释度时也要更换吸管和刮刀。 每个培养皿均要标明培养基种类、样品编号、稀释度 稀释和加样要准确，涂布均匀及时，使用的吸管量程要适宜。 无菌水对照，以检查吸管、刮刀以及稀释用水灭菌是否彻底、操作过程是否合乎无菌要求。 3、菌种保藏技术 菌种是进行微生物学研究和应用的基本材料。 微生物保存不妥容易发生变异，或被其他微生物污染，甚至导致微生物死亡。 菌种的长期保藏是非常必要的。 菌种保藏要求具有该菌种的详细历史及有关实验资料。 基本原理是在挑选优良纯培养物并使新陈代谢处于最低或几乎停止的状态，即使其处于休眠状态基础上，人为地创造一个有利于休眠的环境，使其长期保存后仍能保持菌种原有的优良特性。 基本措施是低温、真空、干燥。 常用保藏方法 定期移植法 液体石蜡法 真空冷冻干燥法 -80℃低温冻结法 液氮超低温冻结法 第5讲微生物检验工作流程与质量控制 1、微生物检验工作流程 a.送检样品的处理 样品的接收 ①样品数量的多少，其包装是否完好，样品温度是否变化。 ②干燥的样品有无受潮现象，冷冻样品是否融化，易腐样品有无腐败变质现象。 ③采样记录。 b.样品登记 注明柜号、品名、客户、采样日期/时间、采样人、追踪编号（半成品）等。 试剂准备 准备检验项目用的所有药品试剂，并放入传递窗。 c.检验前准备工作 药品称量及溶解 药品分装 包扎、灭菌及验证 平皿、吸管的包扎 干燥灭菌 更换工作服 在第一缓冲间内更换专用工作服，并戴口罩、内帽、鞋套。 消毒处理 取样 取样时，对样品袋口用75%酒精喷洒消毒，用无菌器具（镊子、剪刀、小勺）进行取样。 d.样品检验 做样 菌落总数、大肠菌群、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特菌、霉菌/酵母菌的具体检验根据检验规程操作。 培养 操作完成后，放进适宜温度的培养箱内进行培养适当的时间。（例如，LST在36±1℃培养48h，BPW在37 ℃水浴培养18h 等） 洗涮及晾干 e.结果报告 2、微生物检测的质量控制 1检验人员 2仪器.设备 3检验培养基,试剂 4检验环境 5采样 6样品的接收和预处理 7检验质量 8校验的执行 9参考菌株及其保存 10实验室内外部质量控制 11检验报告及结果质量控制 1检验人员 (1)微生物检验不能完全依赖全自动鉴定仪器,检验工作中每一步骤均需要有高度的主观分析和判断能力,与个人的经验.技能和微生物检验基础知识水平密切相关. (2)除要求微生物检验人员必须具备严肃认真的工作态度,精密细致的观察和操作习惯,注重个人卫生外,还必须训练掌握微生物检验技术. (3)检验人员应执行上岗前培训制度,上岗前培训合格方能上岗操作,还要主动参加学习,培训,讲座,学习新技术,掌握微生物学检验方法,标准及相关法律法规 (4)参与编写测试程序及仪器操作程序,学习质量保证体系知识和计量学基本知识 (5)参加各类水平测试和盲样测试,提高检测水平和分析问题,解决问题的能力 (6)微生物学检验室负责人应定期对检验人员进行专业知识和操作熟练程度的考核,提高检验人员的素质. 3培养基 为保证干粉培养基质量指标，在实际工作中应注意； （1）加强包装的密封性能； （2）使用时尽量缩短开盖时间； （3）一般干性培养基放在低温干燥的环境中保存，对于易受潮的品种，启用后宜放入干燥器中保存； （4）由于配制水分不同，启用次数或时间增加，干粉培养基的pH值可能会有所变化，应随时略加调整。 培养基的配制应严格按照标准规定的方法进行操作，并做好原始记录。 为保证培养基必须在玻璃容器，搪瓷或铝锅中进行，如用铜，铁器皿，会对微生物生长有毒害作用； 配制培养基时应按检验项目规定的配方添加，不得随意增减或更改培养基成分。 此外，要用专用的角匙取药品，避免交叉污染而影响检验结果； 培养基配制最好用蒸馏水或去离子水，避免使用自来水，因其中含有氯等抗菌物质； 不同类型的微生物对pH值的要求不同，配制培养基时应测调值，如测定结果与所要求的值不符，则用1N NaOH或1N HCL溶液进行调节。 7检验质量 除按国家标准方法对所需检验项目进行检测外，在实际工作中还应注意以下几个方面，否则会影响检验结果的准确性： （1）在定量检验时用重量法还是用体积法，检验结果会有误差，因为此重不等于1的样品，1ml和1g的化验结果绝不会相等. 一般固态的样品宜用重量法,液体样品宜用体积法. 但对粘性液体(如酸奶),如用体积法,会粘附一定量的样品在吸管上,因此此类样品最好用重量法. (2)如检样需用用无菌水或无菌生理盐水稀释,则最好用均质器或组织碎机,以8000