三文鱼过敏原小清蛋白分离纯化及免疫结构鉴定-食品研究与开发.PDFVIP

食品研究与开发 ２０17 年 2 月 基础研究 Ｆood Research And Development 第 38 卷第 4 期 1 DOI ：10.3969/j .issn.1005-6521.2017.04.001 三文鱼过敏原小清蛋 白分离纯化 及免疫结构鉴定 马涛 ，王一侠 ，金振涛 ，谷瑞增 ，鲁军* （中国食 品发酵工业研究院 北京市蛋 白功能肽工程技术研究 中心 ，北京 100027 ） 摘 要 ： 小清蛋 白是鱼类的主要过敏原 ，三文鱼小清蛋 白具有不 同的亚型 ，分子量相近 ，序列基本相 同，给分 离纯化 带来 了不小的挑战。本试验采用硫 酸铵盐析 、Qxl-Sepharose 离子交换结合凝胶过滤等方法定向纯化 小清蛋 白 β1 型 ， 并应用免疫印迹法对纯化的小清蛋 白进行过敏原性鉴定 ， 结合激光辅助解析/飞行 时间质谱进行结构鉴定。 结果显 示，硫酸铵盐析、离子交换层析结合凝胶过滤纯化方法可以得到纯度达 90 % 以上的小清蛋 白 β1 型 ，且蛋 白具有很 强 的免疫反应活性 。针对该蛋 白的研 究不仅有利 于过敏原检 测方法的建立 ，也可为低致敏性水产品的开发提供理论 依据。 关键词 ： 三文鱼 ；原肌球蛋 白；分 离纯化 ；免疫印迹 Purification and Allergenicity Identification of Salmon Parvalbumin MA Tao ， WANG Yi-xia ，JIN Zhen-tao ， GU Rui-zeng ， LU Jun* （Beijing Engineering Research Center of Protein and Functional Peptides ， China National Research Institute of Food and Fermentation Industries ， Beijing 100027 ， China ） Ａｂｓｔｒａｃｔ ： Parvalbumin is the major allergen of fish species. The different subtypes of salmon parvalbumin with close molecular weight and sequence bring great challenges to protein separation and purification. Parvalbu－ minβ1 was purified by heat treatment ， （NH ）SO salting out method and Qxl-Sepharose chromatography com－ 4 2 4 bined by gel filtration. Western blotting was used to identify the allergenicity of purified Parvalbumin. MALDI- TOF/MS was used to further identify the characteristic of parvalbumin structure. The results revealed that the purity of the parvalbumin β1 was more than 90 percent and it had immunological reactive acti