(生物技术制药)3.动物细胞工程制药-2.ppt

二、转基因动物生产药物 EPO的生产 EPO为糖蛋白，由肾脏产生，刺激造血细胞分化，保持外周血红细胞水平，用于治疗贫血 1.材料：pEPO质粒， pWAP (乳清蛋白），pWAP3（乳清蛋白基因3非翻译区UTR） 2.构建表达载体：乳腺特异性表达载体 pWAP-EPO-WAP3 3.导入大鼠乳腺：脂质体与质粒混合物注射入乳腺 4.表达：ELISA检测乳汁中表达 三、转基因动物作为药物筛选模型 转基因动物可建立敏感动物系以及人类相同疾病的动物模型用于药物筛选，避免了传统的动物模型与人类相似的疾病致病原因、机理不尽相同的缺点，其结果准确、经济，试验次数少，试验时间大大缩短，现已成为人们试图进行药物“快速筛选”的一种手段 目前，已经培育出较多的转基因动物用于药物筛选研究，并已在抗肿瘤药物、抗艾滋病病毒药物、抗肝炎病毒药物、肾脏疾病药物的筛选中取得突破性进展。 转基因动物是当今分子药理学研究的重要手段，是作为疾病模型用于药物筛选的一种重要工具。但仍存在选择的实验动物的种族差异、性别不均衡、转基因产物不一定能长期表达、目的基因能否准确地定位于等位基因上等技术问题 近期主要研究和改进方向 改进表达载体，提高表达水平和产量 利用代谢工程，改进培养工艺，降低生产成本 抑制细胞凋亡，延长培养周期 采用糖基化工程，提高产品质量 转基因动物的研究 组织工程的研究 * 雄原核比原来精子的核大, 雌原核要比雄原核小 受精卵含原核部分发育的一种，动物卵受精后，在两生殖核发生融合之前，可将卵分为含雌原核的卵块和含雄原核的卵块两部分，前者的发育，称雌原核受精卵发育，而后者的发育则称为雄原核受精卵发育。一般雌原核受精卵的发育能力比雄原核受精卵为低。这可能是因为雌原核卵块不易形成分裂中心所致。 * GT基因控制产生一种酶，这种酶使猪细胞表面产生一种糖类物质。当猪器官或细胞被移植给人体时，人类免疫系统能识别这种糖，从而产生强烈的排异反应，把移植的器官或细胞视作外来异物进行攻击。 * 核基质附着区(matrix attachment regions，MARs)是与核基质(或核骨架)特异结合的DNA序列，属于非编码序列，富含AT。通过与核基质的结合，它能使染色质形成独立的环状结构，调控基因的转录和表达，减少由于位置效应引起的转基因沉默。MARs在提高转基因表达水平、消除转基因个体间表达水平的差异、抑制转基因沉默等方面起着重要的作用 * 丙氧鸟苷 * α1-抗胰蛋白酶 α 1 -抗胰蛋白酶缺乏症 是人体内血清蛋白溶解酶（如胰蛋白酶）的主要抑制物。唾液，十二指肠液，呼吸道分泌物，泪液，鼻腔分泌物和脑脊液中都含有α1 -抗胰蛋白酶。α1 -抗胰蛋白酶基因位于第14号染色体，70位等位基因调控其合成。PiZZ型组合，后果极为严重，导致血清α1 -抗胰蛋白酶的水平极度降低。这些病人至成人期易发展为广泛的肺气肿和严重的肝疾病。 方法 显微注射 核移植 胚胎干细胞 逆转录病毒 基因敲除 精子介导 优点 外源基因整合效率较高，不需要载体，目的基因的长度可达100Kb 转基因效率高；预测基因表达水平；可以使用定点整合技术 外源DNA的整合率高； 整合在生殖细胞中的比例也很高。 可在整合点整合转移基因的单个拷贝； 该方法简单、方便 缺点 精密仪器， 技术操作较难，易造成宿主动物基因组的插入突变 供体细胞易衰老 ES细胞株不易建立，长期培养后出现分化现象；生产的转基因动物都是嵌合体 插入的基因有大小限度；嵌合性很高；外源DNA 在动物各种组织中的分布不均 应用具有一定局限性 有些结果不能重复 三、转基因动物反应器 动物生物反应器（bioreactor）:目的片段在器官或组织中表达的转基因动物 生产１克药物蛋白质，用细胞基因工程需800-5000美元，而利用转基因动物只需0.02-0.50美元。 一种新药从研制到上市通常需要10-15年，而转基因动物—乳腺生物反应器，生产周期仅为５年左右 。 几乎任何有生命的器官、组织或其中一部分都可经过人为驯化为生物反应器,从生产的角度考虑，生物反应器选择的组织和器官要方便产物的获得，例如，乳腺、膀胱、血液等，由此发展了乳腺生物反应器, 血液生物反应器和膀胱生物反应器等。 其中，转基因动物乳腺生物反应器的研究最为引人注目。 （一）动物乳腺反应器 乳腺生物反应器的研制，就是通过基因转移技术，将外源基因导入动物体内，通过乳腺特异启动子的控制，获得乳腺生产外源蛋白质的转基因动物。 药用蛋白基因 表达细胞株 细胞核 供体动物 受精卵 无核受精卵 组装的核细胞 胚胎 药用蛋白 乳汁雌性 转基因动物 动物幼崽 假孕动物 受体动物 商业要求