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在 AdvanceBio SEC 聚集体分析之后 进行 Protein A 亲和 IgG 捕获 采用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案 应用简报 生物治疗药物与生物制药 作者 摘要 Patrick Cronan、Timothy Rice 和 本应用简报介绍了使用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案对生物治 Michael Kruger 疗样品中聚集体的定量分析。Protein A 亲和捕获在第一维中进行，而体积排 安捷伦科技公司 阻色谱在第二维中进行。多中心切割用于将样品从第一维转移到第二维。这 项技术能够在一次分析中完成整个表征，无需进行馏分收集和多次进样。 前言 实验部分 软件 Agilent OpenLAB CDS ChemStation 版软 蛋白质治疗远远比小分子药物的治疗 仪器 件以及 Agilent 1290 Infinity 二维液相色 复杂，因此，阐明这种复杂性成为了 本研究使用的二维液相色谱解决方案 谱软件用于配置系统、设置二维液相 一个分析难题。在对这些分子进行开 将 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色 色谱方法以及控制二维液相色谱的数 发和使用期间，需要对它们进行深入 谱作为第一维系统。将 1260 Infinity 生 1 据采集（图 2）。 表征。  物惰性液相色谱系统与安捷伦二维液 Protein A 是在金黄色葡萄球菌细胞壁 相色谱 Quick-Change 快速更换阀头、 样品 中发现的免疫球蛋白-Fc (IgG) 受体。这 多中心切割阀（带有 12 个出厂已安装 样品是购自 Sigma 的 IgG 标准品（部 种蛋白质对多克隆和单克隆 IgG （如 的 40 µL 样品定量环）和 Agilent 1290 件号 I9640）。 Infinity 高速泵联用，用于第二维色谱。 人 IgG 1、IgG 2 和 IgG 4 以及来自兔和 第二维中采用了二极管阵列检测器 小鼠等其他物种的 IgG ）具有较强的 (DAD)。图 1 示出了所用的仪器模块。 亲和性。固定化的 Protein A 常用于 IgG 的制备和生产级纯化。Agilent Bio- Monolith Protein A HPLC 分析型色谱柱 可用于对复杂混合物或纯样品中的 IgG 2,3 进行快速定量分析和小规模纯化 。 体积排阻色谱 (SEC) 则是生物治疗样 品中聚集体定量分析的首选方法。使 用 SEC 聚集体分析之后进行 Protein A IgG 捕获，可生成更准确的表征结 果，因为所分析的样品更加纯净。采 用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解 决方案可使这种分析在一次进样中完 成。IgG 的 Protein A 捕获在第一维中 进行。然后，在多中心切