实验四.免疫印迹.pptVIP

实验十 免疫印迹（Western bloting) 组成 十二烷基磺酸纳-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS） 蛋白质转印 固相免疫测定 蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中三种物理效应： ①样品的浓缩效应 ②凝胶的分子筛效应 ③一般电泳分离的电荷效应 电泳分离的电荷效应 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中，由于SDS和巯基乙醇作用，使得蛋白质分子中二硫键还原，氢键、疏水键打开，SDS按1．4gSDS／lg蛋白质的比例结合到蛋白质多肽链分子上，形成SDS—多肽复合物。 十二烷苯磺酸根带负电，使各种SDS—多肽复合物都带有相同密度的负电荷，它的量大大超过了 蛋白质多肽分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质多肽分子间原有的电荷差别 同时，在水溶液中，SDS—多肽复合物具有近似的形状(长椭圆棒状)，并且不同SDS—多肽复合物的短轴长度趋于一 致，而长轴与分子量成正比。这样，SDS—多肽复合物，在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移率，不再 受蛋白质多肽原有电荷和形状的影响，而只与其分子量有关，并且在一定条件下与迁移率成线性关系 凝胶的分子筛效应 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(acry1amide，简称Acr)和交联剂亚甲双丙烯酰胺(N,N-methylene bisacry1amide，简称Bis)在催化剂的作用下聚合而成 凝胶聚合时所形成的微孔影响了不同SDS—多