HCV 操作规程.doc

丙型肝炎病毒抗体定性诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 文件编号 编写者 编写日期 审核者 批准者 医院 医院： 科： 室： 丙型肝炎病毒抗体定性诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共3 页 第 1 页 1.原理 HCV试剂盒(TRIFMA法)是应用双抗原夹心时间分辨荧光分析法，本分析方法是一种固相时间分辨免疫荧光分析法,基于双抗原夹心的非竞争性免疫分析.所用包被抗原和标记抗原为基因重组抗原(包括HCV病毒结构区核心抗原和非结构区抗原).血清标本中的抗-HCV(包括IgG、IgM等型)与生物素标记的HCV抗原（II）及固相 HCV抗原（I）通过免疫反应，形成固相HCV抗原（I）—抗HCV—HCV（II）—生物素复合物；温育后洗涤，洗去游离的生物抗原；然后加入Eu标记的链亲和素，形成固相HCV抗原（I）—抗HCV—HCV（II）—生物素—链亲和素-Eu复合物；温育后洗涤，洗去游离的Eu标记的链亲和素。加入荧光增强液，增强液将复合物上的Eu解离至溶液中，Eu与增强液中的组分形成荧光络合物，其荧光强度与血清中的抗HCV浓度成正相关。 2.样本处理 血液样本尽快送实验室，室温下离心分离出血清，置于洁净离心管中保存。 3.试剂 本科室使用苏州新波生物技术有限公司丙型肝炎病毒抗体（HCV）时间分辨免疫荧光法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下： 阴阳性对照：2瓶(1m1) 生物素标记HCV抗原冻干品：1瓶(1m1)，使用时复融后作1：21倍稀释 铕标记链亲和素：1瓶(1m1) 保存于Tris缓冲液中，使用时作1：21倍稀释 浓缩洗液：1瓶(40 m1)，使用前用去离子水做1：25倍稀释 增强液：1瓶(20 m1) 微孔反应板：一块(12*8，包被有HCV抗原) 吸头：20支 封片纸：3张(封板用) 说明书：1份 医院： 科： 室 丙型肝炎病毒抗体定性诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共 3 页 第 2 页 4.仪器（用户自备） 时间分辨荧光分析仪，ANYTEST2000； 微孔洗涤机，Egate2310； 微孔振荡器，2510变频振荡器； 5.操作步骤 工作洗液：将浓缩洗液做1：25倍稀释，作为工作洗涤液； 生物素标记抗原工作液：每瓶生物素标记HCV抗原的冻干粉加1000uL纯水，静置30分钟，待其充分溶解。使用前一小时内将其按所需量1：21倍稀释并一次用完(使用一次性的塑料容器来配制)。 将试剂及所需数量的微孔反应条置室温(20—25℃)平衡。 取25ul的阴、阳性对照及待测样本，按顺序加入微孔反应条小孔中。 加生物素标记抗原：每孔加入稀释好的生物素标记抗原工作液100ul。 在室温下，用振荡器缓慢震荡孵育45分钟。 在第一次孵育结束后，用微孔洗涤机洗涤5次。 加Eu标记的链亲和素：每孔加入Eu标记的链亲和素100 ul。 在室温下，用振荡器缓慢震荡孵育15分钟。 第二次孵育结束后，重复用微孔洗涤机洗涤5次。 每孔中加入增强液100u1(加样过程中避免碰到小孔边缘或其中的试剂，尽量 避免污染)，并加贴封片纸。 微孔反应条用振荡器轻摇5分钟，检测(在半小时内完成) 6．临床意义 HCV抗体呈阳性是HCV感染的标志，慢性丙肝患者也能够测到抗-HCV，但急、慢性感染者中抗-HCV有所不同。急性患者多为IgM型，慢性患者多为IgG型，所以，抗-HCV IgG的检测对于献血者的筛选具有重要意义。但是抗-HCV阴性者也并不能完全排除HCV感染，因为抗体并非是检测HCV的直接指标。丙型肝炎的预后不良，目前又无理想的治疗措施，也无疫苗可进行预防接种。所以HCV抗体的检测，对临床上丙型肝炎早发现早治疗的工作日显重要。是目前诊断丙型肝炎诊断的主要指标。 医院： 科： 室 丙型肝炎病毒抗体定性诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共 3 页 第 3 页 7.参考值 阴性对照平均值记为NCx，阳性对照平均值记为PCx。Cutoff=NCx+0.05*PCx。 8．检验结果的解释 8．1 计算各待测样品的S/CO值（待测样品的荧光计数值/ Cutoff值）。 8．2 结果判定：S/CO≥1，判为抗-HCV阳性；S/CO1，判为抗-HCV阴性 8．3 质量控制：NCx应8000，PCx应≥100000。如果NCx≥8000或PCx100000，本次实验无效。 9.注意事项 9.1理解说明书，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。 9.2尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘土中