新生隐球菌.doc

新生隐球菌 1检验目的：从病损中分离隐球菌。 2标本来源：脑脊液、痰、尿、脓液、活体组织及尸检标本等。 3标本收集和制备： 脑脊液：⑴常规腰椎穿刺，抽取3~5ml脑脊液。 ⑵脑脊液离心，2500r/min,15min。 ⑶以无菌吸管吸取离心沉淀1ml。 ⑷直接检查取脑脊液离心沉淀物做印度墨水涂片，发现隐球菌即可诊断为隐球菌性脑脊液。 痰液：标本取晨痰，起床后刷牙，并用无菌蒸馏水漱口数次，包括仰头深刷喉咙，也可在饭后3~4h刷牙漱口后取痰。取痰时应用力咳嗽，咳出肺部深处痰，吐入广口有盖的无菌玻璃瓶中，盖紧，吐痰时尽量不要有唾液，痰量宜3~5ml，立即送检。 尿液：⑴标本应取晨尿。 ⑵男性取标本前应先彻底清洗双手，并用肥皂清洗龟头盒包皮数次，再用无菌蒸馏水冲洗数次。开始排尿应接中断尿，完后立即送检。 ⑶女性则先清洗双手，用肥皂、纱布垫清洗外阴数次，应自前向后，再用无菌整流说冲洗数次，然后开始排尿，当排尿至一半是，另一手持广口无菌玻璃瓶收集尿液。 ⑷尿液标本应立即受检，先离心，2500r/min,10min。然后用无菌吸管移去上清液，余液接种于沙氏琼脂培养基。37度培养4周 脓液：取标本时损害周围应先用70%酒精消毒，对溃破的皮损可刮取脓液，若窦道和瘘道则应刮取窦道和瘘道壁，尽量从较深部位获取标本，应包括部分管壁周围组织，未溃破的脓肿最好使用无菌注射器穿刺抽吸。 组织：组织标本包括尸检和活检材料。标本可来源于皮肤、淋巴结、息肉、溃疡、伤口或其他损害，也可以自于全身任何组织器官。 4检测步骤： （1）直接镜检：取脑脊液离心沉淀物一滴加一小滴印度墨水混合均匀，盖上盖玻片，置镜下检查。 （2）培养检查：取脑脊液、痰、尿、脓液、活体组织及尸检标本加入沙氏培养基内（培养基内可加抗生素，但不能加放线菌酮。放线菌酮对新生隐球菌有抑制作用）。25℃-37℃培养3-12天。 5.结果判断： 直接镜检：墨水涂片可见典型隐球菌形态。一般新生隐球菌呈圆形或椭圆形的双层厚壁孢子，外有一层宽阔荚膜，边缘清楚完整，菌体内可见单个出芽。若脑脊液直接制片未发现菌体，可离心沉淀后重检查。菌体计数：对中枢神经系统隐球菌病患者，脑脊液菌体计数是判断预后及疗效的重要指标。用血细胞计数板计数，在低倍镜下观察，按白细胞计数法计数。 培养检查： ①在沙氏培养基室温及37℃培养2~3天即可生长；少数菌10天后生长。 ②室温下，新生隐球菌在咖啡酸琼脂培养基上3天内会产生棕色色素，具有鉴别意义； ③新生隐球菌可产生尿素酶，使尿素琼脂培养基内酚红变色，可初步判断是否为隐球菌； ④在BHIA培养基上37℃反复培养可使荚膜逐渐增厚。 6.临床意义：直接镜检阳性说明有隐球菌感染，但阴性不能除外诊断。 培养的意义：从临床标本中分离新生隐球菌孢子菌，以确定是否有真菌感染。