[理学]工艺学1 2012.ppt

* RNAi对辅修班不做要求 siRNA是一种能用于沉默基因关闭有害蛋白制造的伟大技术。鉴于siRNA在哺乳动物细胞上抑制基因表达的卓越性能,利用siRNA开发抗肿瘤、抗病毒等药物的工作也已经开始,已有临床实验。 * Small interfering RNA (siRNA)：是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。 siRNA原理:RNA干涉（RNAi）在实验室中是一种强大的实验工具，利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的目标基因的沉寂，迅速阻断基因活性。siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是对特定信使RNA（mRNA）进行降解的指导要素。siRNA是RNAi途径中的中间产物，是RNAi发挥效应所必需的因子。siRNA的形成主要由Dicer和Rde-1调控完成。由于RNA 病毒入侵、转座子转录、基因组中反向重复序列转录等原因,细胞中出现了dsRNA，Rde-1(RNAi缺陷基因-1)编码的蛋白质识别外源dsRNA，当dsRNA达到一定量的时候，Rde-1引导dsRNA与Rde-1编码的Dicer（Dicer是一种RNaseIII 活性核酸内切酶，具有四个结构域：Argonaute家族的PAZ结构域，III型RNA酶活性区域，dsRNA结合区域以及DEAH/DEXHRNA解旋酶活性区）结合，形成酶-dsRNA复合体。在Dicer酶的作用下，细胞中的单链靶mRNA（与dsRNA具有同源序列）与dsRNA的正义链互换，原来dsRNA中的正义链被mRNA代替而从酶-dsRNA复合物中释放出来，然后，在ATP的参与下，细胞中存在的一种RNA诱导的沉默复合体RNA-induced silencing complex （RISC，由核酸内切酶、核酸外切酶、解旋酶等构成，作用是对靶mRNA进行识别和切割）利用结合在其上的核酸内切酶的活性来切割dsRNA上处于原来正义链位置的靶mRNA分子中与dsRNA反义链互补的区域，形成21-23nt的dsRNA小片段，这些小片段即为siRNA。RNAi干涉的关键步骤是组装RISC和合成介导特异性反应的siRNA蛋白。siRNA并入RISC中，然后与靶标基因编码区或UTR区完全配对，降解靶标基因，因此说siRNA只降解与其序列互补配对的mRNA。其调控的机制是通过互补配对而沉默相应靶位基因的表达，所以是一种典型的负调控机制。siRNA识别靶序列是有高度特异性的，因为降解首先在相对于siRNA来说的中央位置发生，所以这些中央的碱基位点就显得极为重要，一旦发生错配就会严重抑制RNAi的效应。siRNA有如下特点：1. 长度约在22nt左右。2. 依赖Dicer酶的加工，是Dicer的产物，所以具有Dicer产物的特点。3. 生成需要Argonaute家族蛋白存在。4. 是RISC组分。5. siRNA合成是由双链的RNA或RNA前体形成的。6. siRNA是人工体外合成的，通过转染进入人体内，是RNA干涉的中间产物。7. 结构上， siRNA是双链RNA。8. 在Dicer酶的加工过程中， siRNA对称地来源于双链RNA的前体的两侧臂。9. 在作用位置上， siRNA可作用于mRNA的任何部位。10. 在作用方式上， siRNA只能导致靶标基因的降解，即为转录水平后调控。11. siRNA不参与生物生长，是RNAi的产物，原始作用是抑制转座子活性和病毒感染。 * 基因疫苗（genetic vaccine）又称核酸疫苗(nucleic acid vaccine)或DNA疫苗，是指将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的载体上，然后直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，该抗原蛋白可直接诱导机体产生免疫应答。 * （二）天然生物药物 1．微生物药物 ( microbial medicine) （1）抗生素 （2）酶抑制剂 （3）免疫抑制剂 (书P11页) 定 义 发 展 分 类 展 望 2．生化药物（含海洋药物） （1）氨基酸类药物 （2）多肽类药物 （3）蛋白质类药物 （4）酶类药物 （5）辅酶类药物 （6）核苷酸与核酸类药物 （7）多糖类药物 （8）脂类药物 （ 书P13页） 定 义 发 展 分 类 展 望 青霉素 酰化酶 C6H5CH2C O = H C6H5CH2C O = N H O = N S CH3 CH3 COOH