论小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)和大豆花叶病毒(SMV)检测试剂盒的研制.pdfVIP

I 小西葫芦黄花叶病毒（ZYMV ）和大豆花叶病毒（SMV ）检测试剂盒的研制 摘 要 从六安市金安区采集有明显花叶或斑驳症状的甜瓜新鲜叶和有明显花叶症 状的大豆新鲜叶，提取总 RNA 并合成 cDNA。根据已报道的小西葫芦黄花叶病毒 (ZYMV)序列和大豆花叶病毒（SMV）序列设计特异引物，分别扩增 ZYMV 的全长 CP 基因和 SMV 的全长 CP 基因。 将 ZYMV 的全长 CP 基因插入原核表达载体 pSBET 后在大肠杆菌 BL21 (DE3) plys S 中诱导表达。通过 12％SDS和 5%-20%梯度 SDS二次制备电泳 纯化诱导产物，免疫小鼠, 获得经过 Western blot 分析为特异的抗 CP 血清。硫 酸铵沉淀法与 Protein A-Red Sepharose 亲和层析相结合提取 IgG，获得效价达 1：4800 的一抗，对西瓜和甜瓜田间样品的间接ELISA 检测表明，ZYMV 在田间普 遍发生，本研究制备的 IgG 可用于 ZYMV 检测。 SMV 的全长 CP 基因与其他 SMV 分离物序列同源性分析结果表明，与目前已 报道的 SMV 不同分离物 CP 基因核苷酸序列同源性为 85.0%~96