485_HPLC法测定通便灵胶囊中番泻叶的含量泻叶的含量.doc

HPLC法测定通便灵胶囊中番泻叶的含量 欧阳卫 张文婷 (江西省食品药品检验所 南昌 330046) 摘要：目的 采用高效液相色谱法测定通便灵胶囊中番泻叶的大黄酸含量。方法 采用 Phenomenox C18色谱柱（250×4.6mm×5μm）；以甲醇-0.1% 磷酸溶液（85：15）为流动相；检测波长为431nm；柱温为30℃；流速为1ml/min；进样量20ul。结果 含量测定的线性范围为3.644-18.22μg/ml，r=0.9999。结论 本方法取样量少，灵敏度高，可用于药品的质量控制。 通便灵胶囊是中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第七册（ 1993）收载的品种,功能与主治为泻热导滞，润肠通便。用于热结便秘，长期卧床便秘，一时性腹胀便秘，老年习惯性便秘。在处方中当归、肉苁蓉为臣药，起补益作用；番泻叶为君药，起泻下作用；番泻叶中所含的蒽醌类衍生物有很强的刺激性，药效主要是双蒽酮甙类如番泻叶甙A、B，其泻下作用及刺激性较其他蒽醌类的泻下药更强，这种结合性状态的蒽醌甙水解后会产生游离甙元大黄酸。原标准中无番泻叶含量测定方法，不能很好地体现其内在质量与功效的关系。在我们通过建立番泻叶中大黄酸的含量测定方法，有效地反映了制剂中番泻叶的含量，从而了控制质量与功效的关系，提高了药品标准质量。 1.对照品、仪器与试剂 大黄酸对照品：中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号为0757-200206。 LC-2010A HT高效液相色谱仪（日本岛津公司） LC solution 色谱工作站 Phenomenox C18(250×4.6mm×5μm，美国菲罗门公司) AE163 电子天平 （瑞士Mettler公司） 四孔电热恒温水浴锅 （绍兴市公路设备仪器有限公司） 所用试剂甲醇为色谱纯，水为双蒸水外，其它试剂均为分析纯。 2.方法和结果 2.1色谱条件和系统适用性要求 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶；甲醇-0.1% 磷酸溶液（85：15）为流动相；检测波长为431nm；柱温为30℃；流速为1ml/min；进样量20ul；在此条件下，理论塔板数以大黄酸峰计算应不低于3000。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取大黄酸对照品适量，加甲醇溶解制成浓度为3.644μg/ml的溶液，摇匀，备用。 2.3标准曲线的绘制与线性关系的考察 2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取大黄酸对照品适量, 加甲醇制成浓度分别为3.644μg/ml，7.288μg/ml，10.972μg/ml ，14.576μg/ml ，18.22μg/ml的溶液，摇匀，备用。 2.3.2 标准曲线的绘制 分别吸取上述对照品溶液20μl注入色谱仪，记录色谱图与峰面积（见表5）。 表5 大黄酸对照品浓度(μg/ml)与峰面积相关性 浓度(μg/ml) 3.644 7.288 10.932 14.576 18.22 峰面积（A） 174804 351750 528264 705497 882254 以对照品浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准 曲线（见图1）。 图1 大黄酸浓度标准曲线 结果表明：大黄酸在 3.644-18.22μg/ml 范围内，r=0.9999。其浓度与峰面积线性关系良好。 2.4 阴性对照试验 按处方组成，取除番泻叶外的其余药材，按制备工艺要求制成不含番泻叶的阴性对照溶液，分别吸取阴性对照溶液与对照品溶液各20μl进行检测，在阴性对照溶液的色谱图中，相应的保留时间内无大黄酸峰出现，表明阴性无干扰。 2.5 精密度实验 取对照品溶液（浓度为3.644μg/ml），在上述色谱条件下，重复进样5次，每次20μl，记录色谱图与峰面积，结果见表6。 表6 精密度实验结果 No 峰面积值 平均值 RSD 1 174544 174465 0.2% 2 174929 3 174679 4 174337 5 173839 结果表明，仪器精密度良好。 2.6 供试品溶液的制备 取本品装量差异下的内容物，研细，混匀，取约0.20克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加入2.5mol/L的硫酸10ml，超声处理5分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，加少量无水硫酸钠脱水，残渣用少量三氯甲烷洗涤，合并，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.7稳定性试验 取同一供试品溶液分别于0、