柑橘小叶病植原体的分子检测及鉴定.pdf

云 南大 学学 报 ( 自然科 学版 ) , 2 00 8 , 30 ( S1) : 69～72 CN 53 - 1045/ N 　ISSN 025 8 - 7 97 1 J our na l of Yunnan Un i er sity Ξ 柑 橘 小 叶 病 植 原 体 的 分 子 检 测 及 鉴 定 邵 　权 , 蔡 　红 , 陈海如 ( ) 云南农业大学 云南省植物病理重点实验室 ,云南 昆明　6 5020 1 摘要 :对 自然表现小叶的柑橘植株 ,利用植原体 16 S r RNA 基 因通用引物进行巢式 PCR 检测 ,得到 1. 2 kb 的特异片段 ,证明此感病植株是由植 原体引起. 将 此特异 片段与 p GEM - T Easy 载体连接并转化到大肠杆 菌 J M109 感受态细胞中 ,通过 PCR 鉴定 、序列测定及同源 性比较分析 ,结果表明此株 系与属于 16 Sr I - B 亚 组的 苜蓿丛枝植原体株系(Lucerne witch es′- broom p hytoplasma strain ,Lu WB) 同源 率达 98 . 88 % ,故认 为该植 原体 株系属植原体 16 Sr I - B 亚组中的成员. 关键词 :柑橘 ;小叶 ;16 S rDN A 序列 ;植原体 ;系统进化 ( ) 中图分类号 :S 4 36 . 661. 1 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :02 58 - 7971 2 00 8 S1 - 00 69 - 04 　　柑橘 ( Cit r us reticul ata Blanco) ,属芸香科柑橘 法参照 Ah rens 等[2 ] 的方法进行 , 提取植株茎端幼 亚科植物 ,是热带 、亚热带常绿果树. 我国是柑橘的 嫩 叶片组织 ,样 品最后于 - 20 ℃冰箱 中保存备用. 重要原产地之一 ,柑橘资源及其丰富. 1. 3 　引物及 PCR 反应条件 　参照 L ee[ 3 ,4 ] 所报道 植原 体 (p h ytop lasma ) ( 原 称 类 菌 原 体 My2 的植原 体 16S rRN A 基 因通 用引物对 R16mF2/ cop lasma - li ke Or gani sm ,ML O) 是一类无细胞壁 , ( R 16m R1 序列和 R 16F2/ R16R 1 序列 预期扩增片 不能人工培养 ,存在于植物韧皮部筛管细胞中的类 段分别为 1. 5 和 1. 2 k b) 合成引物. 反应体系为 25 似植物病原细菌的原核生物. 自 20 世纪 60 年代发 μ μ L ,含 有 1 ×PCR Buffer ,20 0 mol / L dN TP , 2 . 0 现 由植原体 引起 的病害以来 ,现 已发现全世界范围