[生物学]酶促反应动力学辅导版.pptVIP

第9章 酶促反应动力学 研究酶促反应动力学的意义 二、底物浓度对酶反应速率的影响 酶反应速率对底物浓度作图 中间复合物学说 酶底物中间复合物存在的证据 （1）平衡学说 平衡学说推导反应速度方程的假设前提 平衡法推导出的米氏方程 （2）稳态理论 稳态法推导出的米氏方程 两个米氏方程的区别 米氏方程的几个特点 米氏方程曲线 米氏常数的意义 多底物的酶促反应 三、酶的抑制作用 抑制程度的表示方法 抑制作用的类型 可逆抑制作用的3种类型 竞争性抑制剂举例 可逆抑制作用的3种类型 竞争性和非竞争性抑制剂的抑制机理 可逆抑制作用的3种类型 一些重要的不可逆抑制剂 四、温度对酶反应的影响 温度对酶反应速率的影响 五、pH对酶反应的影响 4种酶的pH-酶活性曲线 pH影响酶活力的原因 最适反应pH示意图 六、激活剂对酶反应的影响 激活剂对酶反应的影响 有些物质与酶结合后可以提高酶活力，这些物质称为酶的激活剂（activator）或活化剂，它们大部分是无机离子或小分子化合物，少数是大分子物质如蛋白质。作为激活剂的金属离子有K+、Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Fe2+ 等，它们与酶蛋白结合后，或稳定酶蛋白的构象，或参与底物的结合，或催化反应。 * 一、化学动力学基础 二、底物浓度对酶反应速率的影响 三、酶的抑制作用 四、温度对酶反应的影响 五、pH对酶反应的影响 六、激活剂对酶反应的影响 (kinetics of enzyme-catalyzed reaction) 酶促反应动力学是研究酶促反应的速率以及影响酶反应速率的各种因素的科学。在研究酶的结构与功能的关系以及酶的作用机制时，需要动力学提供实验证据；为发挥酶催化反应的高效率，寻找最有利的反应条件；为了解酶在代谢中的作用和某些药物的作用机制等，都需要掌握酶促反应速率的规律。 为了解释这个现象，Henri和Wurtz提出了酶－底物复合物学说。该学说认为，当酶催化反应时，酶首先与底物结合，生成酶－底物复合物，然后生成产物，并释放出酶。反应用下式表示： S + E ES → P + E 电子显微镜和X光衍射直接观察到酶与底物的复合物。 酶与底物结合后光谱发生变化。 溶解度或热稳定性在加入底物后发生变化。 分离到了酶底物复合物。 超离心沉降过程中，可观察到酶和底物共沉降的现象。 平衡透析时，观察到底物在半透膜两侧浓度不相同(半透膜的一侧有酶，另一侧无酶，有酶一侧底物浓度高于无酶一侧)。 （Henri，Michaelis和Menten方程） 1902年Henri和Brown提出了酶催化的反应机理 1913年Michaelis和Menten完善了这个理论，他们认为酶反应的第一步是快速可逆的平衡，第二步慢，为限速反应。 在推导动力学方程时，有几点假设： ① 第一步迅速平衡，第二步慢，即 k3 k 2 。 ② [S] [E]，[S] [ES]。 ③ 酶以E和ES两种状态存在。 其中 米氏方程是一个双曲线方程，若以[S]为自变量，V为因变量，可以作出双曲线，与实验测得的结果相符。 1925年，Briggs和Haldane提出了稳态（steady state）理论，对米氏方程做了一项很重要的修正： 在 反应式中，k3值不小，后一步骤不是限速步骤。 所谓稳态是指反应进行一段时间后，系统中的酶－底物复合物浓度由零逐渐增加到一定数值，然后保持不变，即处于稳态水平，此时ES的解离和分解速率之和等于ES的形成速率， 其中 这两个方程的区别就在于快速平衡法推导的方程中米氏常数是Ks，而稳态法推导的米氏方程中米氏常数是Km。 Ks是[ES]的解离平衡常数。当 时， 转化成 。 从米氏方程中可以看出： 当[S] Km时， ，反应速率与底物浓度成正比，属一级反应； 当[S] Km时， ，反应速率达到最大，并与底物浓度无关，属零级反应； 当[S] = Km时， ，所以，Km的意义是使反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度。 ① Km是酶的特征性常数，其单位是浓度单位。在一定的反应条件下，对于一定的底物，Km是定值。 ② Km可以判断酶的天然底物。有些酶可以作用于几个底物，其中Km最小的底物是天然底物。 ③ 当k3 k2时，Km = Ks，可以作为判断酶与底物亲和力的指标，Km越小，酶与底物的亲和力越大。 （酶促反应按底物分子数的