高效液相色谱法在中药化学指纹图谱研究中的应用6.pptVIP

高效液相色谱法在中药化学指纹图谱研究中的应用 蒲晓辉 河南大学药学院 ２010年11月3日 1.1中药指纹图谱的定义 中药指纹图谱 1.2指纹化学图谱的起源与发展 　 中药化学指纹图谱借用DNA指纹图谱发展而来中药指纹图谱，即中药身份证，实际上是一种保证中药质量的措施，是指对某种中药材或中成药等运用现代分离分析科学的手段，得到能够标示该中药的色谱或光谱的图谱，最终用来对中药质量评价的科学性方式。 中药化学指纹图谱 1.3指纹化学图谱研究的直接目的 （1） 对中药质量控制的补充和提高。 （2） 控制中间体、成品的一致性，减少批间差异。 1.3.1对中药质量控制的补充和提高 现有《中国药典》质量控制方法及新药申报资料，往往以1个或1个以上成分为控制指标，在一定程度上反映了原药材、中间体及成品的质量，但任何单一的成分都难以准确、全面地评价中药质量，不仅不能进行真伪鉴别和优劣判别，在很多情况下，所检测的指标成分还不具有“惟一性”，另外使用器材比较简单，操作比较粗糙，有时重现性差。 1.3.2控制中间体、成品的一致性，减少批间差异 　 中药生产的原材料，因土壤、气候等环境因素及采收加工的不同，实际使用时不能保证药材质量的稳定，经加工提取得到的中间体，每个批次在成分含量、成分组成及各成分比例方面都不能保持一致。 中药化学指纹图谱中，有相当部分为次生代谢产物，而这些产物的组成和含量不仅和药材本身的种属有关，同时还与植物后天所处的地域环境、生长条件、采摘时间和炮制方法有很大的关系。对于中成药来说，与产品的加工过程也有很大的联系。不同的加工过程与方法都将对所得的指纹图谱有相当影响，表现在峰高、峰面积、保留时间以及峰数量上的变化等。因此，中药化学指纹图谱不仅可以用来对生药的真伪、优劣进行鉴定，同时还可以对中药的加工过程进行监测，可以有效地分析鉴定经过不同的炮制、加工的中成药。 虽然无论是原药材、中间体还是成品，都因组方已固定、生产工艺相对恒定，而使药品的安全性不可能直接通过指纹图谱来保障，但因为中药指纹图谱可直接解决中间体、成品的批间一致性及稳定性问题，从而可以间接并最终保障成品的安全性和有效性。 1-1色谱条件： 色谱柱：Hypersil C18柱(4.6mm× 250mm，5μm)；流动相：乙腈-0.5%磷酸(25:75)；流速 ：1.0mL/min；检测波长：310nm；柱温：40℃；进样量：20μL。指纹图谱记录时间1 h。 1-2供试液的制备 精密称取远志、卵叶远志、白薇、麦冬须根药材各10g，分别置100mL锥形瓶中，加50%甲醇25mL，超声30min，过滤，滤液用50%甲醇定容至25mL，备用。 2方法学考察 2-1精密度试验 取陕西合阳远志药材的供试品溶液，连续进样5次，每次20μL，检测色谱峰，测定各峰的相对保留时间和相对峰面积，结果各峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2.1%，符合指纹图谱技术要求，说明测定方法精密度高。 2-2稳定性试验 取陕西合阳远志药材的供试品溶液，分别在0，3，5，8，12，24 h进样,每次20μL，检测色谱峰，各峰相对保留时间的RSD为0.8%~1.2%，相对峰面积的RSD为1.0%~2.6%。结果表明：供试品溶液常温下在0~24h之间可保持稳定。 2-3重复性试验 取陕西合阳远志样品5份，按1.2供试品溶液的制备方法，在1.1色谱条件下检测色谱峰，结果其相对保留时间和相对峰面积稳定，各峰相对保留时间和相对峰面积的RSD小于2.8%，符合指纹图谱技术要求，说明本方法重复性良好。 2-4指纹图谱的建立及分析结果 存在16个共有指纹峰。 存在15个共有指纹峰。 白薇和麦冬须根的高效液相色谱图 1-1色谱条件 色谱柱：Shim-pack CLC-ODS(150 ×4.6mm)；检测波长：235nm；柱温：25；流速：0.8mL/min; 流动相: 乙腈(A)/ 水(B) 梯度洗脱。线性梯度程序: 0~10 min, 10%~17% (A)；10~30min，17%~35% (A)；30.01min，50%(A)；45min，80% (A)；50min，STOP。 1-2供试品溶液的制备 精密称取过40目筛的连翘粉末1g，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声提取30min，取出静置，放置室温，加甲醇补足损失的重量，取续滤液，备用。用时用0.45μm 的微孔滤膜过滤。 1-3精密度实验 取同一连翘供试品溶液，连续进样5 次，记录色谱图。考察色谱峰相似度的一致性。 1-4重复性实验 取同一连翘样品5 份