[基础医学]临床实验操作常规.doc

二．操作细则 一 临床实验室操作细则 尿液红细胞显微镜检查 1.取新鲜晨尿10ml.置刻度离心管. 2.离心5’，1000转/分。 3.吸弃上清液9.5ml。 将0.5ml沉渣液混均，灌入计数池。 数五大方格RBC计数。 报告：RBC（5大方格计数）/5= 万/ml 正常值：0.8 - 1万/ml 注： 标本留取要求：新鲜晨尿50ml 结果正常参考值：0.4～1.0万/ml 尿液中红细胞形态分类： 均一型:形态、大小、血红蛋白一致占50%以上。 多形型:形态、大小不一、血红蛋白色素深浅不一占50%以上。 混合型:均一型、多形型各占50%。 影红细胞:血红蛋白受PH、渗透压的影响，仅剩细胞膜成圈状。 注意事项：标本送检后应在4小时内化验完，但也可离心后放置于4(C冰箱保存待检。 （王生余） 2．双缩脲法测定尿液总蛋白 一．标本:收集24小时全部尿液（须加甲苯10ml防腐剂）记总量。 二．方法: 1.取大试管,取样本5ml. 2.加0.15mol/L H2SO42.5ml,加1.5%Na2WO42.5ml,加50%HAc0.5～1.0ml,使尿液PH7.0 3.静置10分钟,离心3000转/分10分钟,弃上清保留沉淀,加NS 1ml混匀。 4.B管加NS1ml。 5.S管加标准血清蛋白50ul+NS至1ml 6.各加双缩脲试剂4ml,充分混匀，37℃水浴10分钟。 7.再离心5min,1500转/分。 8.721分光光度计比色, 波长540nm，1cm比色杯。 三.计算: u 50μl 蛋白(g/100ml)=───×标准血清蛋白浓度×─── s 5ml 四.试剂: 1．0.15mol/L H2SO4:取4.2ml浓H2SO4+蒸馏水至1000ml（配制时应先加水，H2SO4缓慢加入H2O 中）。 2.1.5%Na2WO4. 100ml蒸馏水中溶解1.5克钨酸钠,可加热助溶。 3.双缩脲试剂:(贮存液) 分别溶解硫酸铜1.5克,酒石酸钾钠6克, NaOH 30g,三者混合后加蒸馏水至500 ml； 使用时用蒸馏水稀释一倍。 注： 标本留取要求：从即日6：00解去小便后，其后至次日6：00所有的小便皆留取在容器内，所留尿即为24小时尿。在气温高于20(C的情况下，容器内要放入适量的甲苯防腐。 正常参考值：24小时尿蛋白(0.40g。 操作注意事项： 注意尿蛋白定性程度，必要时进行适当的稀释。 每配制一次双缩脲试剂，均需进行定标。 （王生余） 3．激光比浊法测定尿液C3、α2-m 及血、尿kappa chain、lamda chain 仪器：BEKMAN 的IMAGE系统 操作：取1ml尿样本或血清，6000rpm离心5分钟，取上清液进行测定，按照仪器的工作菜单进行程序设置，对样本进行检测。 注： 标本留取要求：新鲜晨尿50ml 正常参考： C3： ( 2.70mg/L α2-m： ( 2.86mg/L 尿kappa chain： ( 35.0 mg/L 尿λchain： ( 50.0 mg/L 血kappa chain：3.30～ 6.97 g/L 血λchain：7.45～15.28 g/L （王生余） 4.尿溶菌酶测定 一.先将微球菌种于琼脂平皿37℃培养24小时,用pH6.4磷酸盐缓冲液洗下菌落,配成OD值在0.4～0.6之间,菌液需新鲜.波长为 470nm,0.5cm的比色杯。菌种需每周克氏双糖管接种一次。 二.pH6.4磷酸盐缓冲液: 1.1/15M KH2PO4:4.53g+DW至500ml. 2.1/15M Na2HPO4:12g+DW至500ml. 3.取①73ml+②27ml即为pH6.4PBS或 4.KH2PO46.61g+Na2PO46.48g+Dw→1000ml 三.0.5M KOH: KOH28g+蒸馏水至100ml 四. 标准曲线及测定方法: 1.称10mg溶菌酶+pH6.4PBS10ml 2.100μg/ml溶菌酶液:取①液1ml+9.0mlpH6.4PBS 3.分别配制5μg、10μg、15μg、20μg、25μg/ml标准液. 100μg/ml溶菌酶:0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 (ml) PH 7.4 PBS: 4.75 4.50 4.25 4.00