[工学]8吸光光度法.ppt

王 燕 棱镜分光 三. 仪器和方法 入射狭缝：光源的光由此进入单色器 准光装置：透镜或反射镜使入射光成为平行光束 聚焦装置：将分光后的单色光聚焦至出口狭缝 （透镜或凹面镜） 色散元件：将复合光分解成单色光 光栅分光原理 三. 仪器和方法 利用不同波长入射光产生干涉条纹的衍射角不同而将复合光分成单色光。 ＊ 样品室 用于放置各种类型的吸收池(比色皿)和相应的池架附件 三. 仪器和方法 比色皿厚度: 0.5, 1, 2, 3, …cm 比色皿: 石英池和玻璃池 ＊ 检测器 作用:通过光电效应，使透过吸收池的光信号变成可测的电信号的装置。 （光电管或光电倍增管） 三. 仪器和方法 要求：对测定波长范围内的光有快速、灵敏的响应，产生的光电流应与照射于检测器上的光强度成正比。 (1)光电管 (2)光电二极管阵列 (1)光电管 三. 仪器和方法 涂光敏材料 光照 光敏材料 产生电子 产生电流 电压 光强度大 电流大 (2)光电二极管阵列 三. 仪器和方法 电容器 充电 电容器 放电 光照射 再次充电 测量周期 电容器充电的电量?每个二极管检测到的光子数目成正比?光子数与光强度成正比。通过测量整个波长范围内光强的变化就可得到吸收光谱。 ＊显示器 由检流计、数字显示、微机组 成的自动控制和结果处理系统 三. 仪器和方法 四、显色反应和显色条件的选择 1.显色剂作用 2. 显色反应的选择 3. 影响显色反应的因素 4. 显色剂的分类 1.作用 无色或浅色 试样 有色物 +显色剂 比色 显色反应 配合反应 氧化还原反应 缩合反应 重氮化—偶氮化反应 四、显色反应和显色条件的选择 2.显色反应的选择 灵敏度高 κ=104－105 (2) 选择性好 (3) 有色物组成恒定，化学性质稳定 (4) 显色剂在测定波长处无明显吸收 对比度=λmax有色物 -λmax显色剂＞60nm 四、显色反应和显色条件的选择 3.影响显色反应的因素 (1) 显色剂用量 根据吸光度A与显色剂浓度cR的关系来确定 cR选择——引起A变化最小处的cR（即曲线平坦处） M + R MR 四、显色反应和显色条件的选择 例： Fe(ssal)+ 紫红色 pH=1.8~2.5 pH=4~8 Fe(ssal)-2 橙红色 pH=8~11.5 Fe(ssal) 3 3- 黄色 显色时间和温度 由实验得出 溶剂 一般选择水作溶剂 (2) 显色溶液的pH值 测定不同pH值下，显色溶液的吸光度A，以A为纵坐标，pH为横坐标，制图。 选择曲线平坦处pH 四、显色反应和显色条件的选择 吸光光度法 光谱分析法 原子吸收法 红外光谱法 原子发射法 核磁共振法 荧光光谱法 紫外可见分光光度法 分子光谱 原子光谱 光分析方法 可见分光光度法 概述 仪器和方法 显色反应和显色条件的选择 吸光光度法 原理 物质对光的选择性吸收 光的吸收定律 具体应用 单组分测定 多组分测定 示差法测定 测定条件的选择 参比液 入射光 读数范围 一. 概述 吸光光度法: 基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法。 分类：根据物质所吸收光的波长范围不同，分为紫外、可见及红外分光光度法。 基本方法： 有色物质浓度 ~ 颜色深浅 ~ 吸收光程度 通过比较颜色深浅（吸收光程度），测定物质的浓度。 方法分类和比较 10-5 ~ 10-6 mol?L-1 10-5 ~ 10-8 mol?L-1 比色分析法 分光光度法 测定下限 相对误差 5% ~ 10% 2% ~ 5% 适用于分析半微量和微量的物质 一. 概述 方法的评价 适用面广 快速、简便 分析有色、无色、浅色物 溶液状态、均质固态样品 灵敏度高：浓度下限达10-5~10-6 mol·L-1 准确度高：相对误差通常为2~5％， 显色 比色 一. 概述 用于化学平衡等的研究 二 . 吸光光度法的基本原理 1.可见光与颜色 阳光 棱镜 连续光谱 物质 不连续光谱 由两种或两种以上波长的光所组成 复合光 可见光区的划分 : 400 450 500 550 600 650 760 λ/nm 互补光的对应关系 光的互补：蓝?黄 二 . 吸光光度法的基本原理 光谱示意 表观现象示意 2. 物质对光的选择性吸收 二 . 吸光光度法的基本原理 物质的颜色与光的关系 复合光 完全吸收 完全透过 吸收黄色光 复合光 （3）同一物质c不同时吸收曲线不同, λmax 不变; （4）