日用牙刷上菌的探究.docVIP

题目：日用牙刷上菌的探究 摘要： 我们的研究对象为长期使用过的牙刷。首先，从所选研究物品上提取菌，制作菌悬液；其次，制作培养基，用三线法接菌于培养基上进行培养；而后，提取不同种类菌，分别进行培养，此步为纯化菌的过程；再次，取纯化后的菌做鉴定实验，确定为何种菌。 关键词：牙刷、 引言： 牙刷的细菌污染与保管和使用不当有关。如果刷牙后，不用清水多冲洗及此，那么，沾在牙刷上的细菌会利用残留在牙刷上的牙膏糖分来生长繁殖，而当你再次刷牙时，这些细菌可以通过直接吞咽或从破损的口腔粘膜而侵入人体，引起各种疾病。 我们此次实验的目的就是通过对牙刷菌的探究确定菌的种类、大小等特征，来引起人们对其的关注，希望人们可以对自己的生活习惯做出审视，正确自己的生活习惯，如每天用开水牙刷、每三个月换牙刷等。 实验材料： 蒸馏水、酒精灯、接种环、牙刷、牛肉膏蛋白胨培养基、显微镜、 实验方法： 1。?? ? 提取菌：取灭菌后的烧杯两只，分别放入等量少许的蒸馏水，将实验选取的牙刷分别浸入两只烧杯内，进行搅拌，此过程中应注意勿沾染其他菌，所以除牙刷外，其他用品应保持无菌，两只烧杯要注意标明其内菌液种类。 2.???? ? 制作培养基： ①．称量：按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏（0.9g）、蛋白胨(3g)、NaCL(1.5g)放入烧杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。 ②．熔化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。药品完全溶解后，补充水道所需的总体积。 ③．调PH：在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐渐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用PH试纸测其PH，直至PH达到7.4~7.6。反之，用1mol/LHCL进行调节。 ④．过滤：趁热用滤纸或多层纱布滤过。（可省略） ⑤．分装：将配置的培养基分装入三角瓶内。 ⑥．加塞：培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉签，一阻止外界微生物进入培养基内而造成污染。 ⑦．包扎：三角瓶加塞后，外包旧报纸，用麻绳以活结形式扎好，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配置日期。 ⑧．灭菌：将上述培养基于0.1MPa，121℃，20min高压蒸汽灭菌 3.???? ? 菌的初步培养：倒平板，将牛肉膏蛋白胨培养基熔化后倒平板，厚度一般为平板的1.5~2倍。无菌棉签沾取菌悬液后，将沾取的菌涂布在平板上后，将培养基放入37℃培养箱内进行培养1~2天。 4.???? ? 菌的提取：倒平板后，从第一次培养的菌中选取适当菌落，用接菌针挑取少许菌，用三线法在新的平板上划线后，放入37℃培养箱内进行培养，此过程保证无菌操作。 5. 菌的纯化：观察第二次接菌培养的平板上单个颜色不同菌落的个数为3，取3个新的培养皿，分别标记为白色菌，淡黄色菌，以及金黄色菌，灭菌后，倒平板，将第二次接菌平板上的不同菌，对应各个新平板上的名称，用三线法继续接菌，后将其放入37℃培养箱内进行培养。接菌过程无菌操作。 6. 菌种的保存：取6只试管，每两支为一组，分别标记为白色，淡黄，金黄，试管灭菌后，倒斜面，由第二次接菌培养的3个不同平板上各选取单个菌落，用接菌针挑取菌，对应标记分别将不同菌接于对应的试管斜面上，后放入37℃培养箱内培养2~3天，观察菌种生长状况，然后将斜面放入冰箱内保存。 7.???? ? 用分离后的各种菌进行如下实验： ①．糖发酵（产酸、产气）： Ⅰ. 用记号笔在各试管外壁上分别标明发酵培养基的名称和所接种的细菌名称。 取葡萄糖发酵培养基试管4支，分别接入金黄色、淡黄色、白色菌，第4只不接种，作为对照。另取乳糖发酵培养基试管4支，同样分别接入金黄色、淡黄色、白色菌，第4支不接种，作为对照。在接种后，轻缓摇动试管，使其均匀，防止倒置的小管进入气泡将接过种和作为对照的8支试管均置37℃中培养24~48小时。观察各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡。M.V.C实验： Ⅰ. 接种与培养 ⅰ. 用接菌针将3种纯化后的菌分别穿刺入2支醋酸铅培养基中（硫化氢试验），置37℃培养48h。 ⅱ. 将上述3种菌分别接入3支蛋白胨水培养基（吲哚试验）、3支葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验和伏﹣普试验）和3支柠檬酸盐斜面培养基（柠檬酸试验）中，置37℃培养48h。 Ⅱ. 结果观察 ⅰ. 硫化氢试验：培养48h后，观察黑色硫化铅的产生。 ⅱ. 吲哚试验：于培养48h后的蛋白胨水培养基内加入3 ~4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上升后，沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂。在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。 ⅲ. 甲基红试验：培养48h后，将1支葡萄糖蛋白胨水培养物内加入甲基红试剂2滴，培养基变为红色者为阳性，变为黄色者为阴性。