igf之ⅱ基因启动子甲基化状态与肝癌发生关系研究教材_课件.pptVIP

IGF-Ⅱ基因启动子甲基化状态 与肝癌发生关系研究 南通大学附属医院临床医学研究中心 研究背景 肝细胞癌(HCC)是与慢性病毒感染密切相关 流行病调查,我国目前约9 300万乙肝病毒携带者,约4 000万丙型肝炎病毒感染者。 预后差,5年生存率约11﹪。 遗传学 基因突变 基因杂合丢失 微卫星不稳定 原癌基因激活抑癌基因失活 肝癌 表观遗传学 DNA甲基化 组蛋白修饰 染色体重塑 肝癌发病机制 DNA 甲基化原理 DNA甲基化主要发生在CpG二核苷序列的胞嘧啶上 胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ) IGF-Ⅱ是一种与肿瘤形成密切相关的促有丝分裂原,在细胞增殖、分化、糖代谢调节方面有重要作用。 IGF-Ⅱ在胎肝和新生儿肝脏中基因有大量表达,但出生后基因迅速降低直至关闭,肝细胞癌变时IGF2 Ⅱ呈胚胎性过量表达,并具有强烈的致有丝分裂剂作用,参与肿瘤细胞增生及分化。 IGF-Ⅱ基因启动子与基因表达的关系 E1 E2 E3 E4 E5 E6 E7 E8 E9 P1 P2 P3 P4 人 P2 IGF-Ⅱ信号途径与肝癌 IGF-Ⅱ IRS SHC p p p p p p PI3K Akt Ras Raf MAPK IGF-ⅠR Proliferation Survival Metastasis IGF-Ⅱ IGF-Ⅱ 实验目的 本研究动态观察鼠肝细胞癌变过程中IGF-Ⅱ基因启动子甲基化状态改变及其与IGF-Ⅱ基因表达的关系; 同时分析人不同肝组织中IGF-Ⅱ基因启动子甲基化状态及与临床病理学特征之间的关系,探讨IGF-Ⅱ启动子甲基化状态改变在HCC形成中的作用机制。 材料和方法 以2-乙酰氨基芴(2-FAA)喂饲雄性Sprague-Dawley(SD)鼠诱发肝细胞癌变,通过病理组织学方法(HE染色)观察肝细胞形态学动态变化; 以甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测鼠IGF-Ⅱ基因P2甲基化状态;以酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测鼠外周血和肝组织IGF-Ⅱ基因的蛋白表达水平; 以MSP检测人类肝细胞癌、癌旁以及正常肝脏组织IGF-Ⅱ基因P3甲基化状态。 表2 诱癌过程中鼠血和肝IGF-Ⅱ表达水平的定量分析 1、Pearson相关显示,鼠肝和血IGF-Ⅱ蛋白浓度呈正相关(r = 0.97,P = 0.000) 2、Spearman相关显示,IGF-ⅡP2去甲基化与外周血(rs = -0.89,P = 0.000)和鼠肝蛋白浓度均呈正相关(rs = 0.84,P = 0.000)