医学分子生物学-3 PCR.pptVIP

课程主要内容 第二章 分子生物学常用技术 核酸 (DNA, RNA) 碱基互补配对A=T, C≡G, A=U 核酸变性与复性 核酸合成 DNA复制（DNA－DNA）， 逆转 录（RNA－DNA）； 转 录（DNA－RNA）， RNA复制（RNA－RNA）； 如何获得单链DNA模板？？ 多种蛋白质参与（以大肠杆菌为例） DNA聚合酶——DNA生物合成 2006年诺贝尔化学奖得主 罗杰·科恩伯格揭示了真核生物体内的细胞如何利用基因内存储的信息生产蛋白质，而理解这一点具有医学上的“基础性”作用，因为人类的多种疾病如癌症、心脏病等都与这一过程发生紊乱有关。 DNA复制中为何需RNA引物？ DNA聚合酶没有从头催化2个游离的脱氧核苷三磷酸聚合的能力； 只能在3’-OH端与按碱基配对的dNTP进行反应，生成磷酸二酯键； 引物提供游离的3’-OH末端； 一、聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction, PCR) PCR－酶促DNA合成 PCR的主要用途 （一）目的基因的克隆，序列分析 （二）基因的体外突变，多态性研究 （三）DNA的微量分析 PCR扩增条件 94℃,