手性药物对映体的高效毛细管电泳拆分方法.doc

手性药物对映体的高效毛细管电泳拆分方法 第2lD卷第4期 2OO4年12月 长春中医学院 AcademicPeriodical0fChangehtmCollegeofTraditionalChineseMedicine Vo1.20 4,2004 手性药物对映体的高效毛细管电泳拆分方法 陆亚男.刘大有.刘淑华.孙永旭 (1.长春中医学院2001级研究生,吉林长春130117;2.长春中医学院,吉林长春130117; 3.长春中医学院2002级研究生,吉林长春130117) 摘要:目的:手性药物对映体的高效毛细血管电泳拆分.方法:非色谱法与色谱法.结果:手性药物 对映体之间可能存在着不同的生物活性和药理作用.结论:此方法具有高效,高速,低耗和价格低廉的优点. 关键词:手性药物;对映体;拆分;HPCE 中图分类号:R284.1文献标识码:B文章编号:1007—48l3(2004)04—0034—02 手性药物的拆分技术通常分为非色谱法与色谱法2类. 传统的非色谱法主要有分步结晶法,酶消化法等.这些方法过 程复杂,耗时较长,且难于制备较纯净的对映体,难以适应现 代工业化大生产的要求,因此已逐渐被色谱法所取代. 对映体色谱拆分的原理.比较流行的是Dalgliesh等提出 三点作用原理…即在对映体和手性选择之间至少应存在3 个作用点,其中一个必须有立体选择性,这个作用力可以是吸 引的,也可以是排斥的.以区别2个对映体.尽管这一理论不 能解释全部色谱手性拆分的现象,但在实际应用中,仍然被用 做解释色谱拆分机理的重要工具.本文主要就近年新发展起 来的高效毛细管电泳技术做一重点介绍. 高效毛细血管电泳(1{】E)具有高效,高速.低耗和价格低 廉等特点.与HPI~相比,虽遵循不同分析原理,但均为液相 分离技术,都有多种分离模式,如毛细管区带电泳(czz).胶柬 电动毛细管色谱(加C),毛细管凝胶电泳(CGE)等】. 1毛细管区带电泳【Q) 毛细管区带电泳是毛细管电泳中最基本的一种,无需固 体介质支持,因而不存在基质效应,能分离强度差别较小的组 分.其用于分离手性药物的机理为在缓冲液中加入手性试 剂,依据药物对映体与手性试剂形成的结合物的络合常数不 同,造成表现迁移率的差异而分离.常用的手性添加剂以环 糊精及其衍生物应用较多】,如FiⅡet以环糊精作为手性 选择剂分离一系列酸性药物,而StaleupL5则使用了高硫酸盐 环糊精. 环糊精(CD)是一类环形寡聚糖.根据分子中葡萄糖单元 个数的不同,可分为a,B,了三类,它们分别为6,7,8个【)-吡哺 葡萄糖(含手性碳原子)通过a-I,4羟基连在一起的环状化合 物,其内部具有直径不等的内腔,空腔内部为疏水性,外部有 羟基,具有亲水性.徐佳认为环糊精类型对手性分离的影 响较大,其CD内腔的大小对手性识别的影响很显着,如a—CD (直径为O.57rim)只适于分离分子直径小且取代基少的对映 体.CD内腔的疏水性及内腔边缘的疏水基团和亲水基团都 影响其手性识别能力,被分析物和手性选择剂的疏水作用是 起决定性作用.CD内腔边缘的亲水性基团羟基的存在也影 响分离的效果.一般认为甲基化取代的DM-~-CD比CD分 离效果好,而全部甲基化的TM.CD分离能力较差】,但芮建 中等以TM-~-CD为手性选择剂,同时测定维拉帕米和去甲 维拉帕米的血浆浓度,也取得了较好的效果.张锴等[9采用7 种环糊精为毛细管电泳手性选择剂成功分离了美沙酮等6种 手性药物,并认为,高硫酸盐环糊精是一种很好的手性选择剂. Q中另一种常用的手性选择剂为蛋白质类.与HPI~相 比,这种做法样品和添加剂用量少.有利于分离昂贵稀有的蛋 白质或其它生物分子;其次由于分子能在与生理条件非常相 似的环境中悬浮,比起基质和载体的共价结合更方便.如 Bttseh等叫用牛血清蛋白,酸性糖蛋白和纤维素酶做手性选 择剂分离了色氨酸,作者认为,蛋白质与对映体的作用主要是 靠其肽链或糖单元位置上有选择地与两对映体形成氢键. 2胶束电动毛细管色谱【MEKC或MECC) 胶柬电动毛细管色谱是以胶柬为假固定相的一种电动色 谱,是在电泳分离缓冲液中加入离子型表面活性剂胶囊,使电 中性物质能根据其在胶相和水相的分配系数不同而进行分离. 常用的手性胶囊一般为胆汁盐,它是由最多不超过1O个 单体组成的小胶囊,是一种常见的生物表面活性剂,具有先导 活性.也有手性混合胶囊,由具有手性的表面活性剂,氨基 酸,环糊精及牛血清白蛋白等加入SD6(十二烷基硫酸钠)胶囊 构成.溶质与胶囊的作用机制尚不明确,Dobarhi…认为,胶囊 的手性分离作用是由于对映体与胶囊的手性中心形成氢键. 同时尿素和甲醇的加入可以有效改善峰形和分离度.由于胆 汁盐宜在高电渗条件下使用,因此.缓冲液PH高比较好,因