[理学]-第十四章高效液相色谱法.pdf

第十四章高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography, HPLC 概述 概念：高效液相色谱法(HPLC)是在20世纪60年代末， 以经典液相色谱为基础，引入了气相色谱的理论， 在技术上采用了高效固定相、高压输液系统和高灵 敏度的在线检测器，从而发展起来的一种新型分离 分析技术。随着科学和技术的不断改进与发展，目 前已成为应用极为重要、广泛的分离分析手段。 特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操 作自动化。 高效液相色谱与经典液相色谱比较 经典液相色谱 高效液相色谱 常压或减压 高压，40～50MPa 填料颗粒大 填料颗粒小，2～50μm 柱效低 柱效高,40000～60000块/m 分析速度慢 分析速度快 色谱柱只用一次 色谱柱可重复多次使用 不能在线检测 能在线检测 HPLC:采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器 HPLC特点：高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便 高效液相色谱与经典液相色谱比较 气相色谱 高效液相色谱 只能分析挥发性物质，只能分析 几乎可以分析各种物质 20%的化合物 不能分析热不稳定物质 可以分析热不稳定物质 用毛细管色谱可得到很高的柱效 色谱柱不能很长，柱效不会很高 有很灵敏的检测器如ECD和较灵 没有较高灵敏的通用检测器 敏的通用检测器(FID和TCD) 流动相为气体，无毒，易于处理 流动相有毒，费用较高 运行和操作容易 运行和操作比GC难一些 仪器制造难度较小 仪器制造难度大 5 高效液相色谱法的分类 根据分离机理 根据固定相分类 • 液-液分配色谱 • 液-液色谱 • 化学键合相色谱 • 液-固色谱 • 液-固吸附色谱 • 离子交换色谱 • 离子色谱 • 离子对色谱 • 尺寸排阻色谱 • 亲和色谱 需要指出的是每种色谱方法通常存在一种起支配作用的主要保留机理， 但可能还存在次要的其他机理。 6 正相色谱和反相色谱 根据固定相和液体流动相相对极性的差别，有正相色谱和 反相色谱两种色谱体系或方法。 反相色谱和正相色谱主要区别是流动相和固定相的相对极 性，（反相：流动相的极性大于固定相；正相：流动相的 极性小于固定相）。最初形成于液液分配色谱，现已广泛 应用于其他各种色谱方法。 7 高效液相色谱仪 1.储液瓶 （输液管入口端安装有 过滤器）；2.高压输液泵；3.混合