[理学]DNA复制.ppt

* * 突变的类型 （1）碱基对的置换——如错配（点突变） 一个碱基改变 转换 颠换 错义突变 无义突变 （2）移码突变——如缺失、插入和框移突变 片段插入或缺失 诱变剂的作用 DNA突变可能导致肿瘤的发生: 沉默突变：突变影响非必需的DNA或突变对一个基因的功能的影响可忽略，称为沉默突变。 回复突变：一些突变可以克服第一次突变造成的影响，这类突变称为回复突变。 动物细胞的突变与癌的发生有强烈的相关性。 同源重组 Holliday模型 “亲本链” “重组体” DNA的重组 免疫球蛋白基因的重排(双链断裂重接模型): 特异位点重组 转座: 是基因进化的一种重要方式,它不是重组,但利用了重组的过程,它是一段DNA或其拷贝从基因组的一个位置转移到另一位置，并在插入位点两测产生1对很短的正向重复序列 根据转座机制可分为2个大的范畴: DNA转座子 以DNA区段作为转座成分 又可分为复制转座和保守转座 逆转录转座子 以RNA为中介 转座重组 掌握DNA的半保留复及DNA复制的起点与方向 掌握原核细胞DNA的复制 熟悉真核生物DNA复制特点 DNA克隆(DNA cloning)：应用酶学的方法，在体外将目的基因与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子—复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子的过程。DNA克隆又称基因克隆（gene cloning）。 基因工程（genetic engineering）：实现基因克隆所采用的方法及相关的工作。又称重组DNA技术（recombinant DNA technology） 一、克隆体系：目的基因、载体DNA、工具酶、宿主细胞等 1、目的基因（target gene）：cDNA或基因组DNA 2、载体(vector)：质粒、噬菌体、柯斯质粒载体、病毒和人工染色体等 cDNA （complementary DNA）：指体外经反转录合成的，与RNA （常指mRNA）互补的单链DNA,单链cDNA进而合成双链cDNA。 基因组DNA（genomic DNA）：代表一个细胞或生物体整套遗传信息的所有DNA序列，称为基因组DNA。 质粒（plasmid）：存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子，在细胞中可以独立进行复制并在细胞分裂时恒定地传给子代细胞。 3、工具酶：限制性核酸内切酶、连接酶、DNA聚合酶、逆转录酶、碱性磷酸酶、末端聚合酶、RNA酶、DNA酶，等 4、宿主细胞：大肠杆菌、酵母、动物细胞 DNA克隆的基本过程 分、切、接、转、筛、表达 一、“分”：目的基因及载体的制备 1、分离基因的方法：化学合成、PCR、基因组文库、cDNA文库 2、常用载体：质粒、噬菌体、病毒DNA 二、“切”：限制性内切酶切割目的基因和载体DNA 三、“接”：重组体的构建 四、“转”：重组DNA分子导入受体细胞 五、“筛”：筛选出含重组DNA的受体细胞 1、直接选择法：遗传标记【抗药性标志选择、营养缺陷型的互补筛选法及分子标记（PCR、分子杂交）】 2、非直接选择法：免疫化学法、酶联免疫检测法 六、“表达”：使克隆基因在宿主细胞中复制、表达 1、外源基因在原核细胞的表达 大肠杆菌是最常用的原核表达体系 真核基因在原核细胞中表达的蛋白质常常形成不溶性的包涵体 2、真核表达体系：酵母、昆虫及哺乳动物细胞等 重组DNA技术与分子医学的关系 疾病基因的发现、发展新药物、DNA诊断、基因治疗及遗传病的防治 一、疾病相关基因分析 1、功能克隆（functional cloning）：根据基因的功能（通常是根据其蛋白质）产物来寻找、克隆与疾病相关的基因 2、定位克隆（positional cloning）：从一种致病基因的染色体定位出发逐步缩小范围，最后克隆该基因 二、制造生物活性蛋白 三、基因诊断 基因诊断：利用分子生物学的基本原理和技术，在DNA或RNA水平上分析、鉴定与某些疾病有关基因的改变（基因结构及其表达水平的异常） 遗传病的产前诊断、感染性疾病的快速诊断、某些肿瘤的早期诊断以及器官移植供体的选择和法医学鉴定等 四、基因治疗 基因治疗（gene therapy）：将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，从而达到治疗疾病目的的方法 1、基因治疗的方法 （分类） （1）基因矫正（gene correction）：将致病基因的异常碱基进行纠正，而保留正常部分 （2）基因置换（gene replacement）：正常基因通过同源