第五章酶的作用机制和酶的调节1.ppt

第五章 酶的改性理论—— 酶的作用机制和调节 一 酶的组成与结构 酶的化学组成 酶的化学结构 酶的空间结构 酶的化学组成 1蛋白类酶的基本组成单位 组成蛋白质的氨基酸主要有20种 氨基酸的名称、代号与结构 性质：两性解离、等电点、极性、颜色反应等 2核酸类酶的基本组成单位 核苷酸的名称、代号与结构 3酶的辅因子 对酶的催化作用具有辅助作用的非生物大分子部分 A 无基辅因子 B 有机辅因子 烟酰胺、黄素核苷酸、铁卟啉、硫辛酸、核苷三磷酸 二、酶的活性部位 酶活性部位的特点Ⅰ 胰凝乳蛋白酶活性部位的结构 酶活性部位的特点Ⅱ 研究酶活性部位的方法 酶分子侧链基团的化学修饰法 非特异性共价修饰 特异性共价修饰 DFP修饰酶的Ser残基的反应 亲和标记法 TPCK对胰凝乳蛋白酶的亲和标记 TPE和TPCK的结构 动力学参数测定法 X射线晶体结构分析法 定点突变法 三、影响酶催化效率的有关因素 底物和酶的邻近效应与定向效应 底物的形变和诱导契合 酸碱催化 一些氨基酸残基的广义酸碱形式 共价催化 金属离子催化 活性部位微环境的影响 四、酶催化反应机制的实例 溶菌酶 细菌细胞壁多糖 溶菌酶的一级结构 溶菌酶催化反应的特异性 溶菌酶催化水解的糖苷键 溶菌酶的有效底物 溶菌酶活性部位的催化位点 吡喃糖环的椅式和船式构象 溶菌酶底物的半椅式构象 溶菌酶活性部位的催化位点 糖苷键的断裂位点 溶菌酶的催化基团 溶菌酶的催化机制 丝氨酸蛋白酶 消化作用的丝氨酸蛋白酶 三种消化蛋白酶的一级结构比较 胰凝乳蛋白酶的三维结构 胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶的底物结合口袋 胰凝乳蛋白酶与eglin C的结合 胰凝乳蛋白酶的催化三联体 胰凝乳蛋白酶中催化三联体的作用 His57的互变异构 胰凝乳蛋白酶的催化机制Ⅰ 胰凝乳蛋白酶的催化机制Ⅱ 五、酶活性的调节控制 别构调控 天冬氨酸转氨甲酰酶 脱敏反应 ATCase的亚基结合方式 ATCase半分子的三维结构 酶与底物结合后的构象变化 酶与底物结合后的构象变化 硝基甲烷修饰ATCase 底物结合到ATCase上引起高度协同的别构转变 琥珀酸与杂交酶结合后硝基Tyr吸收光谱的变化 别构剂对酶构象的影响 ATP和CTP与酶结合后酶的构象及硝基Tyr吸收光谱的变化 酶原的激活 酶原或蛋白质前体激活举例 胰凝乳蛋白酶原的激活 胰凝乳蛋白酶原的激活 胃蛋白酶原的激活 胰蛋白酶原的激活 胰蛋白酶原的激活 胰蛋白酶对各种胰脏蛋白酶原的激活作用 生理止血过程Ⅰ 生理止血过程Ⅱ 凝血机制 凝血因子 因子X激活的两种途径 内源性途径 外源性途径 可逆的共价修饰 酶修饰反应的例子 酶修饰反应的例子 六、同工酶 乳酸脱氢酶催化的反应 乳酸脱氢酶同工酶 乳酸脱氢酶同工酶酶谱 同工酶存在的意义 给杂交酶加ATP，硝基酪氨酸430nm的光吸收增加，与加琥珀酸情况相同；而给杂交酶加CTP，430nm的光吸收减少。此实验说明别构激活剂和别构抑制剂都能引起构象变化，但变化的结果不同。ATP的结合使酶的构象平衡向R型转变，而CTP的结合使酶的构象平衡向T型转变。 标记三聚体 标记三聚体 有些酶在刚合成出来时没有活性，称为酶原（zymogen或proenzyme）。酶原经蛋白水解酶在特定位点切割后，产生有活性的酶，这种方式称为酶原的激活。有一些不是酶的蛋白质，也需要经特定的蛋白酶水解才有功能，这些蛋白质在没有活化之前称为前体（precursor）。 使蛋白质水解的消化酶，在胃和胰脏中刚合成时是以酶原的形式存在，分泌到肠胃中被切割后才成为有活性的酶。 血液凝固系统中许多酶都是以酶原的形式存在，到需要血液凝固时才被激活。 胰岛素刚合成出来是前胰岛素原（preproinsulin），经蛋白酶切割后成为有活性的胰岛素。 不溶性的胶原，是由可溶性的前胶原激活而成的。 在需要时，前胶原酶转变成活性的胶原酶，降解胶原。如蝌蚪尾巴的消失。 胰凝乳蛋白酶原是胰腺分泌的、由245个氨基酸残基组成的单链肽，有5对二硫键。经胰蛋白酶作用，Arg15与Ile16之间的肽键断裂，才具有酶活性，这种酶称为π－胰凝乳蛋白酶。π型酶活性最高，但不稳定，它再作用于其它π型酶分子上，使之失去两个二肽（Ser14-Arg15和Thr147-Asn148）后成为稳定形式α－胰凝乳蛋白酶。α型酶有3条肽链，A链和B链之间以及B链和C链之间各有一对二硫键连接。 胃蛋白酶原是由胃壁细胞分泌的，分子量为38.9×103，由392个氨基酸残基组成。在胃酸H+的作用下，低于pH5时，酶原自动激活，从氨基端失去44个氨基酸残基的碱性片段，成为有活性的胃蛋白酶。胃蛋白酶的最适反应pH为2，其活性部位含