第二章酶促反应动力学2.ppt

斜率 斜率 竞争性：I与S与酶活性中心结合机会均等 V下降发生抑制 Km增大亲和力 Vmax不变 [S] 增大， I结合机率减小 Km 变大，Vmax不变 2.非竞争性抑制 截距 V下降发生抑制 Km不变 亲和力不受影响 Vmax减小 部分酶始终失活 Km不变，Vmax变小 3. 反竞争性抑制作用 Km、Vmax都变小 上图反映出温度如何影响酶活力？ 产物累积量 相对酶活％ 最适温度 最适温度 动物酶 35~40℃ 植物酶 40~50℃ 微生物 大部分 40~50℃ 个别高温菌 90℃以上 四、温度对酶反应的影响 温度越高，活化分子越多，反应速度快； 酶变性时间越短，反应速度下降也迅速。 最适pH因酶而异，多数酶在7.0左右 五、pH 对酶反应的影响 最适pH时的酶活力最大 是酶的特性之一 六、激活剂对酶反应的影响 ①无机离子 阳离子 K+、Ca2+、Na+、Mg2+、Zn2+等 阴离子 Cl -、Br -等 ②中等大小的有机分子 ③某些激酶 * * （3） kcat/km的意义： V= Vmax[S] Km + [S] ∵Vmax=kcat[Et] ∴ V= kcat[Et][S] Km + [S] 当[S] Km时，[E]＝[Et] 是E和S反应形成产物的表观二级速率常数。 其大小可用于比较酶的催化效率。 kcat/km＝ kcat/km的上限为k1,即生成ES的速率，即酶的催化效率不超过E和S形成ES的结合速率 kcat/km的大小可以比较不同酶或同一种酶催化不同底物的催化效率。 （1）Lineweaver-Burk双倒数作图法 3、 Km与V的求取 蔗糖酶米氏常数（Km）的测定 1. 配12支蔗糖底物溶液，浓度分别为0、0.005、0.00625、0.0075、0.00875、0.010、0.0125、0.015、0.02、0.025、0.0375、0.050M，在35℃水浴保温； 2. 加入3U/ml已在35 ℃水浴保温的酶溶液，准确作用5分钟，终止反应； 3. 各吸取0.5ml反应液与3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5分钟，冷却后在540nm测定吸光度OD值； 4. 作图 三、酶的抑制作用 失活作用：使酶Pr变性而引起酶活力丧失。 抑制作用：使酶活力下降但不引起变性。 抑制剂：能引起抑制作用的物质。 （一）抑制程度的表示方法 V0 ： Vi ： 不加入抑制剂时的反应速率 加入抑制剂后的反应速率 以反应速率的变化表示 1.相对活力分数（残余活力分数） 2.相对活力百分数（残余活力百分数） V0 Vi Vi V0 3.抑制分数 ——指被抑制而失去活力的分数 V0 Vi 4.抑制百分数 Vi V0 抑 制 率 依据： 能否用透析、超滤等物理方法 除去抑制剂，使酶复活。 不可逆抑制与可逆抑制 （二）抑制作用的分类 1、不可逆抑制作用 ： 抑制剂与酶必需基团以牢固的共价键相连 很多为剧毒物质 重金属、有机磷、有机汞、有机砷、 氰化物、青霉素、毒鼠强等。 不可逆抑制 不可逆抑制剂 非专一性不可逆抑制剂 （作用于一/几类基团） 专一性不可逆抑制剂 （作用于某一种酶的 活性部位基团） 2、不可逆抑制剂 不可逆抑制 （1） 非专一性不可逆抑制剂 ①重金属离子 Ag+ 、 Cu2+ 、 Hg2+ 、 Pb2+ 、 Fe3+ 高浓度时可使酶蛋白变性失活； 低浓度时对酶活性产生抑制。 ——通过加入EDTA解除 ? H2N-CH-COOH ? CH2 ? SH H2N-CH-COOH ? CH2 ? S-CH2COOH ICH2COOH HI ②烷化剂（多为卤素化合物） + + 碘乙酸 ③有机磷化合物（敌百虫、沙林） 胆碱酯酶OH P OC2H5 OC2H