第四章1生物信息的传递下从mrna到蛋白质4.ppt

第四章 生物信息的传递（下） —从mRNA到蛋白质;一、概述 蛋白质合成——翻译： 指将mRNA链上的核苷酸从一个特定的起始位点开始，按三个核苷酸代表一个氨基酸的原则，依次合成一条多肽链的过程。;蛋白质合成的场所：核糖体 合成的模板：mRNA 合成的原料：氨基酸 运送氨基酸的工具：tRNA 复杂性：多种RNA、蛋白质、酶等生物大分子参与这一过程。如真核生物，参与蛋白质合成的有： 核糖体蛋白：70多种 氨酰-tRNA合成酶：20多种 ;起始因子、延伸因子、终止因子：10多种 tRNA：50种左右 各种mRNA和rRNA 参与蛋白质翻译后加工的酶：100多种 有高能化合物参与 共计有近300种大分子参与 各种组分约占细胞干重的35% 合成代谢能量90%消耗在蛋白质合成上。;二、遗传密码的破译;（一）遗传密码的试拼 1954年G.Gamov对破译密码首先提出了设想 若1个碱基对应与一种氨基酸，那么只可能产生4种氨基酸; 若2个碱基编码一种氨基酸的话，4种碱基共有42=16种不同的排列组合; 3个碱基编码一种氨基酸，经排列组合可产生43=64种不同形式 若是四联密码，就会产生44=256种排列组合。;（二）三联密码的证实;;开始用原黄素诱导的突变称FCO，它们只能在B菌株上生长形成噬菌斑 他们再用原黄素诱导产生回复突变，在E.coli K（λ）菌株中出现了噬菌斑。 用遗传学的方法和野生型杂交发现它们并不是真正的野生型。 校正突变（A suppressor mutation）抵消或抑制了前一次突变的效应。;;加入或减少三个密码子，读码框不变 结论： 1.密码的阅读有方向性 2.三个碱基编码一个氨基酸 3.从固定起点阅读 ;（三）利用突变来解读密码;（四）无细胞系统的建立; 方法: (1) 去模板：用DNAase处理E.coli抽提物，使DNA降解，除去原有的细菌模板。 (2) 加入polU：合成了多聚苯丙氨酸， 这一结果不仅证实了无细胞系统的成功，同时还表明UUU是苯丙氨酸的密码子。 分别加入polyA，polyC 和polyG 结果相应地获得了多聚赖氨酸，多聚脯氨酸和多聚甘氨酸。; (3) 按比例加入２种核苷混合的多聚物 Nirenberg想出了一种方法，就是按一定的碱基比例来合成RNA。 比如在底物中加5份的U和1份的G， 碱基比为U：G＝5：1， 它们能组成8种三联体： UUU，UUG，UGU，GUU， GGG，GGU，GUG，UGG。 U和G将随机地加入到三联体中，这样按比例各个位点上进入U和G的概率不同，如氨基酸测定结果：;如UUU：UGG＝（5?5?5）:（5?1?1） ＝ 25 ： 1 同理UUU：UUG ＝5 ：1， 根据检测结果推测: 苯丙氨酸（UUU）：半胱氨酸（UGU） ＝ 5 ： 1 苯丙氨酸（UUU）：缬氨酸（GUU） ＝ 5 ： 1 苯丙氨酸（UUU）：甘氨酸（GGU） ＝ 25 ： 1 ;（五）三联体结合实验;;（六）利用重复共聚物破译密码;;;（七）终止密码子的确定;1962年Benzer和他的学生S.Champe 发现野生型T4的rⅡ有两个顺反子rⅡA和rⅡB，共同转录一个多顺反子mRNA，但翻译成两个分开的蛋白A和B。突变型rl589，被证明是缺失所造成，缺失的区域含rⅡA基因右边的大部分，和rⅡB左边的小部分。rl589的产物是一条多肽，但无蛋白A的活性，但有B蛋白的活性。 Benzer认为，这种缺失可能使mRNA失去了A蛋白合成“终止”和“B”蛋白合成“起始”的密码子，因此翻译时沿着一条mRNA阅读下去，产生了一条长的肽链。 ;;1964年Brenner及其同事获得了T4噬菌体编码头部蛋白基因的琥珀突变（amber），并进行了精细作图; 并分离研究了各种突变型的多肽。 突变型的肽链比野生型的要短，因此可以推测琥珀突变可能产生终止密码子，使肽的合成在中途停止下来； 由于突变位点越靠近基因的左端，所产生的肽链越短，越靠近右端越接近野生型，据此可以推测翻译的过程是从mRNA的5′端向3′阅读。 肽链的合成是从N端向C端延伸。 ;;1965年Weigert,M.和Garen,证明E.coli中无义密码子的碱基组成为UAA和UAG。 最后1967年Brennr和Crick证明UGA是第三个无义密码子。 三个终止密码子: UAA叫赭石（oc