[生物学]12抗体酶2 hours.pptVIP

抗体酶（Abzyme) 1.1948年Pauling的预言： 抗体酶的理论基础早在1948年就曾被Pauling所预言。他指出：酶的催化作用是由于酶在催化化学反应过程中，活性中心同底物的过渡态（transition state）或高能反应中间体（high-energy reaction intermediates)产生互补，从而加速化学反应的进行。 抗体酶催化的化学反应类型举例 Diels-Alder反应 酰胺水解 Claisen重排 酮的选择性还原 消除反应 简述Diels-Alder抗体酶设计 An Antibody exo Diels-Alderase Inhibitor Complex at 1.95?Angstrom Resolution 下面为一二茂铁衍生物的分子式 上面为二茂铁衍生物晶体中的结合情况 我们可以看到分子间是以酰胺中的氧和羧酸基中的羟基结合成氢键 结构式中二茂铁衍生物为反式结构 Fab 13G5为一种抗体他有两条链构成红色为一条轻链，绿色为一条重链，与之相对应的抗原就是刚才提到的二茂铁化合物（编号为9）。上图为抗体与抗原的立体结合示意图。从中我们可以看到抗原深深的“埋进”了抗体中。 从这张图中我们更可以清楚地看到9 “埋进”一个很小的“口袋”里 下面我们具体看一以下抗体和抗原的结合情况 Gly——甘氨酸 Tyr——酪氨酸 Asn——天冬酰胺 Asp——天冬胺酸 His——组氨酸 Ser——丝氨酸 Trp——色氨酸 L ——为轻链 H——为重链 (A) 没有氢键形成(B) 为双烯体形成氢键 (C)双烯体形成氢键, (D)同时形成氢键. Activation energies for (A), (B), (C), and (D) are 22.2,?21.1,?16.3,?and 12.2?kcal/mol (A) (3R,4R)-exo, (B) (3S,4S)-exo, (C) (3R,4S)-endo, and (D) (3S,4R)-endo.只有A能同时形成像9一样的三根氢键 这也是众多抗体酶催化能力 不如天然酶的原因：尽管化合 物4很好地模拟了真实过渡态的 几何构象，但它未能模拟反应中 形成的高能中间体的极化性质！ 多数抗体酶的绝对效率仍比相应的酶低几个数量级。大部分催化抗体与进化优化的酶的催化活性相差甚远。这就促使我们探讨 —— 1. 我们注意到：设计的半抗原类似物并不能与反应的过渡态完全吻合,因此与这种不完善类似物互补的抗体也就不能提供对真正过渡态的最适稳定化。 2. 对多底物的多步反应来说，我们要想设计出很难一种合适的过渡态类似物比较困难。 3. Pauling的结合过渡态的思想只能说是部分正确的。按照Menger的酶催化理论,底物有2个部位:结合部位和反应部位。使底物结合部位稳定化固然可以加速反应进行，但同时使底物反应部位不稳定化(通过在反应部位的增加距离和去溶剂化作用)也是直接的催化潜力。而我们放在后者上的注意力却并不够。 提高催化抗体性能的改进 (1)克隆免疫反应因子的基因 通过扩增免疫动物的脾细胞或杂交细胞的ｍＲＮＡ,得出单独产生重链和轻链的噬菌体文库,再通过载体中存在的非对称限制点位使它们重新组合。这样的含有上百万个高水平表达的轻链和重链片断的文库可能在大肠杆菌中表达和组装。这样的文库在保留亲本单克隆识别和亲合特性的基础上利用了免疫因子的多样性,使我们可从多得多的可能性中选择催化抗体。　　　　 (2)改变半抗原的抗体结合点位的亲水/疏水性质　　 在半抗原中引入一个带电荷残基,它在抗体中诱导出的互补性功能团对底物产生协同作用;半抗原上中性氨基酸的存在可诱导氢键的生成;抗原上大片非极性表面可使抗体中产生疏水袋。所有这些,都可在不同程度上提高催化抗体的性能。　　 (3)催化抗体的结合位点的遗传和化学修饰　　 通过抗体结合点位的有选择的化学衍生,把天然的或人工合成的催化基团引入;或是利用点位专一性突变,引起抗体结合点位氨基酸的改变, 提高了催化抗体的性能。　　 (4)多种半抗原的综合应用　　 过渡态相似物与过渡态总是存在差异,但是要做到过渡态相似物的某一部分与过渡态的这一部分相同却是可能的,可以合成多种的过渡态相似物,每一相似物分别与过渡态的某一部分相同。以这样的过渡态相似物作为半抗原逐一免疫动物,多次地采用细胞杂交技术,最后所得的催化抗体的性能优于单一半抗原所诱导的催化抗体。 ?在不久的将来，有可能研究成功蛋白质氨基酸序列快速分析的抗体酶， 从而大大简化和加速蛋白质氨基酸序列的测定。 ?通过对抗体酶的研究，对其过渡态类似物结构的研究，无疑对确定基 元反应的过渡态提供十分有用的信