[生物学]第4章四 固定化酶的性质.pptVIP

三、医疗方面的应用 酶制剂已在临床上取得有效应用，并逐渐发展用酶治病的酶疗法。 酶本身是一种蛋白质，进入人体后产生抗体，能引起患者过敏性休克。 酶不稳定，易失活，进入人体后在蛋白酶作用下易被水解而失去治疗作用。 制成固定化酶，稳定性增加，不被蛋白酶水解，又不与机体直接接触，可避免产生抗体，因而为酶治疗开辟了前景。 将酶包埋在半透膜性质的聚合物内，即可制得微小胶事囊型固定化酶。胶囊型酶使囊外蛋白酶、抗体等不能进入囊内部接触，所以在利用其来治病时，不会在患者体内产生抗体，避免过敏性反应。 L天门冬酰氨酶是第一种用于治疗癌症的酶类药物 但天然的L—门冬酰胺酶进入人体会产生抗体，出现休克 如制成固定化酶可避兔上述抗体反应。将尼龙薄膜制成微囊型固定化酶，或用硝酸纤细素微囊化再与戊二醛交联用于治疗小白鼠白血病，与对照组相比，疗效明显。 四、诊断、分析方面的应用 酶的专一性可以便酶在一个复杂体系中，不受其他物质千扰，准确地测出某一物质含量。 目前国外已普遍将酶学分析法应用于化学分析和临床诊断等方面。 实践证明酶学分析法具有灵敏度高、专一性强等优点。 近来已发展成为快速、准确、灵敏、自动化的分析方法。 1．酶试纸的应用 将酶固定于纸片上，制成能测定某些物质的含量的试纸，用于诊断，非常简便、迅速。 尿糖试纸(葡萄糖氧化酶，过氧化氢酶） 2．酶柱 固定化酶装入柱内，让样品通过酶柱后，用光化学或电化学方法测定流出液中底物的减少、产物的增加或辅助因子的变化 3．酶管 将酶直接共价结合于内径1mm、长3m的尼龙管或聚苯乙烯管内壁，当待测溶液通过酶管后，生成的产物可以在自动分析系统中连续测定。 目前已制成脲酶、葡萄糖氧化酶等酶管。国外已制成多种酶管自动分析仪，作为商品出售。其优点在于可连续、快速、自动地测定微量样品。 4．酶电极 酶电极可能是固定化酶当前研究和应用最活跃的领域之一，它使酶分析进展到高度简便化、自动化、微型化和连续化。 目前常用的几种酶电极有：脲酶电极测定尿素、葡萄糖氧化酶电极测定葡萄糖、乳酸脱氢酶电极测定乳酸、青霉素酶电极测定青霉素等。 五、环境保护方面的应用 1．环境监则 根据固定化酶用于化学分析的原理，固定化酶(细胞)也可以用于测定有毒物质含量以进行环境监测。 2。处理工业废水 以往人们利用活性污泥来处理污水。现在人们尝试从活性污泥中分离出微生物，然再后将其固定，由此组成快速、高效，能连续处理工业污水的系统。 固定化增殖细胞优点 固定化细胞的密度大、可增殖，因而可获得高度密集而体积缩小的工程菌集合体，不需要微生物菌体的多次培养、扩大，从而缩短了发酵生产周期，可提高生产能力； 发酵稳定性好，可以较长时间反复使用或连续使用，有希望将发酵罐改变为反应柱进行连续生产； 发酵液中含菌体较少，有利于产品分离纯化，提高产品质量等。 固定化细胞的缺点 利用的仅是胞内酶，而细胞内多种酶的存在，会形成不需要的副产物； 细胞膜、细胞壁和载体都存在着扩散限制作用; 载体形成的孔隙大小影响高分子底物的通透性 一、固定化细胞分类 分类方式 固定化细胞 细胞类型 微生物细胞 植物细胞 动物细胞 生理状态 死细胞 完整细胞、细胞碎片、细胞器 活细胞 增殖细胞、静止细胞、饥饿细胞 固定化死细胞 固定化死细胞一般在固定化之前或之后细胞经过物理或化学方法的处理，如加热、匀浆、干燥、冷冻、酸及表面活性剂等处理，目的在于增加细胞膜的渗透性或抑制副反应，所以比较适于单酶催化的反应。 固定化活细胞 固定化静止细胞和饥俄细胞在固定化之后细胞是活的，但是由于采用控制措施，细胞并不生长繁殖，而是处于休眠状态或饥饿状态。 固定化生长细胞又称固定化增殖细胞．是将活细胞固定在载体上并使其在连续反应过程中保持旺盛的生长、繁殖能力的一种固定化方法。更适合于进行多酶顺序连续反应。 二、固定化细胞的制备 固定化酶的方法大部分适合于微生物细胞的固定化。 可采用微生物自身的絮凝能力来制备无载体固定化细胞。 要求保持高的活力保留和具有操作稳定性。 几种方法的特点 化学法(共价交联)涉及菌或细胞的化学修饰。由于所用化学药品的毒性，可引起细胞破坏。因此，反应耍在尽可能温和的条件下进行。在使用中细胞间、细胞和载体间的键不易被底物或盐所破坏，操作稳定性高。 吸附螯合法条件温和、方法简便，但载体和细胞间吸附力弱，操作时细胞易从载体脱落，特别是底物分子量高，介质的离子强度和pH变化情况下更是如此，所以操作稳定性差，但优点是可再生。 包埋法从理论上来说细胞和载体间没有束缚，固定化后应保持高活力，然而实际上限制酶活力的因素较多，且这类方法只适于小分子底物。要固定活细胞、增殖细胞，显然包埋法占优势，尤其采用卡拉胶、海藻酸钙等材料更好。 交联法没有良好机械强度．所以不适于实际应用