电镜样品制作规程.docVIP

透射电镜超薄切片样品制作常规 1.取材:规格:2mm粗细,10mm以下长条形; 2.缓冲液清洗:除尘，除杂质; 3.固定:2%～3%戊二醛,2hr以上; 4.缓冲液清洗:10min×3； 5.锇酸固定:2~3hr； 用过的锇酸用试管避光保存 6.缓冲液清洗:10min×3； 7.梯度乙醇脱水: 50%、70%、80%、90%各15min； 100% 30min×3； 8.置换,浸渍: 丙酮 包埋剂混合液 浸渍时间 （动物样品） 浸渍时间 （植物样品） 1 0 30min×3 30min×3 3 1 1 hr 2~3 hr 2 2 1~4 hr 2~3 hr 1 3 4~8 hr 12~24 hr 0 4 4~24 hr 12~24 hr 9.包埋: 纯包埋剂倒入包埋槽，样品定向放置其中； 10.聚合: 60℃，48hr； 11.修块:成金字塔形,顶部面积约0.2mm×0.2mm; 超薄切片:50～110nm,粘铜网； 12.醋酸铀染色,清洗:铜网样品面朝蜡板上的醋酸铀滴,避光漂染5~15min； 蒸馏水3×30次; 醋酸铀配方：50%乙醇：2%硝酸铀→配成1~3%饱和溶液； 13.柠檬酸铅染色,清洗:铜网样品面朝蜡板上的柠檬酸铅滴,避光漂染5~10min； 0.01%NaOH 30次, 蒸馏水3×30次; 柠檬酸铅配方：硝酸铅︰柠檬酸钠︰蒸馏水（去CO2）=1.33g︰1.76g︰30ml；振荡； 加1N NaOH 5ml；加双蒸水至50ml； 扫描电镜样品制作常规 1．取材: 规格:不超过样品台大小； 2．缓冲液清洗: 除尘，除杂质； 3．固定:2%～3%戊二醛,2hr以上; 4．清洗: PBS缓冲液（或双蒸水），10min×3； 5．梯度乙醇脱水: 50%、70%、80%、90%各15min； 100% 30min×3； 6. 置换：叔丁醇30 min×3； 7．冷冻干燥：叔丁醇淹没样品，置冷冻干燥机，干燥2~3hr； 8．粘样：将样品以方便观察的体位粘于样品台上； 9．镀膜：离子溅射仪镀膜120s，约10nm； 4-2.制作包埋剂 包埋剂配方(常规30ml配方,其余参考配方表) EPON812 (g) MNA (g) DDSA (g) DMP-30 (g, 0.2g/ 10滴) 总量 (g) 16.3 9.2 4.6 0.45 30 叔丁醇45℃预热