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第三次实验 内容 一、ABO血型鉴定　　　　 (操作) 二、溶菌酶实验 (操作) 三、小吞噬试验（体外法） (操作) 实验目的 1.掌握凝集反应的概念及类型 2.掌握玻片凝集反应的操作方法及结果判定 3.掌握显微镜的使用方法 4.熟悉固有免疫的组成及格成分的作用机制 分类: 1.直接凝集反应（direct agglutination）： 颗粒性抗原与相应的抗体直接结合出现的凝集 现象。↗玻片凝集实验 ↘试管凝集实验 2.间接凝集反应（indirect agglutination）： 将可溶性抗原（或抗体）吸附在与免疫无关的载体颗粒表面，然后再与相应抗体（或抗原）混合，在适当条件下，出现特异性凝集现象。 一 、血型鉴定(ABO血型系统) 【原理】 根据红细胞膜上的抗原（A、B抗原）不同，用已知的抗A、抗B血清与待检血液作直接凝集反应，观察凝集情况判定是否存在有相应的抗原（A、B抗原）以确定受试者的ABO血型。 在人类血清中天然存在针对红细胞膜上的抗原的不同血型抗体，当不同血型的人进行输血时，则可因血型抗原与相应抗体结合，并在补体参与下发生溶血反应。为了防止输血反应的发生，临床上给病人输血（或作器官移植）时，必须进行血型的鉴定，同时尚须进行交叉配血试验，以复核定型时有无错误或其它不规则凝集素的存在。 问题：O型血是万能输血者吗？AB型血是万能受血者吗？ 玻片法 【材料】 1、标准血清：抗A、抗B血清(试剂盒) 2、灭菌采血针、75%酒精、棉签、洁净载玻片、标签笔、牙签等。 【结果观察与判定】 若混合液由均匀混浊状逐渐变为透明，并出现大小不等的红色凝集块，即为RBC凝集；若混合液仍呈均匀浑浊状，则表明RBC未凝集。 二、溶菌酶的溶菌作用 【原理】 溶菌酶是正常体液与分泌液中所含的一种小分子碱性蛋白质，它能水解革兰阳性菌细胞壁中的肽聚糖成分，使细菌细胞崩解。溶菌酶是非特异性免疫中一种重要的体液物质。 【材料】 1、人的唾液、溶菌酶标准品、生理盐水。 2、细球菌 3、无菌琼脂培养平板、灭菌的1ml吸管、毛细吸管、 打孔器、平皿、牙签和橡皮乳头。 4、接种环、酒精灯 机体内具有吞噬功能的细胞可分为两大类，即小吞噬细胞和大吞噬细胞。小吞噬细胞一般指血液中的中性粒细胞，大吞噬细胞则是存在于组织中的巨噬细胞和血液中的单核细胞。它们构成机体天然防御机制的一部分，对外来异物具有吞噬和消化的作用。 【方法】 1、取洁净载玻片一张，用标签笔于玻片反面分别标明A、B 。 2、用75％酒精消毒手指末端，待酒精干后用灭菌的采血针刺破皮肤，于玻片上A、B两格中各滴1滴血液，立即用无菌干棉签压迫止血。 3、在A格血中加入抗A血清1滴，B格中加入抗B血清1滴，然后用牙签混匀（不可用同一端混匀两格）。 4、将玻片置于实验台上，室温下静置1—5min后在白色背景下观察凝集情况。 ＡＢＯ血型鉴定 1、取玻片一张， 划分两格标记Ａ、Ｂ ２、消毒手指，采血， 于Ａ、Ｂ各滴加一滴 　3、Ａ格中滴加抗Ａ血清， Ｂ格中滴加抗Ｂ血清 4、牙签混匀，1-5min后 观察有无凝集现象 血凝试验强度 “＋”表示红细胞凝集，“－”表示红细胞未凝集 o — — AB + + B + — A — + 血型 抗B试剂侧 抗A试剂侧 血型鉴定结果与判定 【方法】 1、取无菌琼脂培养平板一个，用接种环采用连续 划线方法将细球菌接种到平板上（注意无菌操作） 2、用无菌打孔器打孔，用牙签挑出孔中琼脂。 3、用双蒸水漱口，略待片刻将唾液及漱口水一并吐于无菌平皿内，用毛细吸管吸出，滴入孔内，并同时分别加入生理盐水和溶菌酶标准品。置37 ℃ ，18h后观察结果。 【结果观察】 在加唾液孔及标准品孔周围出现一圈明显的溶菌环，测量溶菌环的直径，加生理盐水孔周围无溶菌环出现。 三、 吞噬细胞的作用 小吞噬试验 （体外法） 【材料】 （1）菌液：表皮葡萄球菌菌液 （2）抗凝剂：枸橼酸钠 （3）毛细吸管、凹玻片、载玻片、推片、牙签、瑞氏-姬姆萨染料、pH6.4 PB、75%酒精、棉签、采血针等。 【方法】 1、取厚凹玻片一张，在凹孔中滴加一滴枸橼酸钠 2、酒精棉球消毒手指后，用采血针从消毒部位采取2大滴血加入凹孔中混匀； 3、加表皮葡萄球菌菌液1