[医药卫生]液相、气相色谱法.ppt

假峰 1、柱吸附样品，随后解吸：更换衬管，如不能解决问题，就从柱进样口端去掉5-10cm，再重新安装；　 2、注射器污染：用新注射器及干净的溶剂试一试，如假峰消失，就将注射器冲洗几次；　 3、载气不纯；更换纯度满足要求的载气。　 基线不规则或不稳定 1.柱流失或污染：更换衬套。如不能解决问题，就从柱进口端去掉一段，并重新安装。 2.检测器或进样器污染：清洗检测器和进样器 3.载气泄漏：更换隔垫，检查柱泄漏。 4.载气控制不协调：检查载所源压力是否充足。如压力 ≤500psi，请更换气瓶。 5.载气有杂质或气路污染：更换气瓶，使用载气净化装置清洁金属管。 6.载气流速不在仪器使用范围之内（包括FID用氢气和空气）：测量流速，并根据使用手册技术指标，予以验证。 7.检测器出毛病：参照仪器使用手册进行检查。 8.进样器隔垫流失：老化或更换隔垫 谢谢大家！ 2012年3月 * * * * * * * 气相色谱柱使用注意事项 气相色谱柱在领取安装及使用过程中应避免碰撞、强烈震动、小角度弯曲致使断裂。 安装气相色谱柱时，为防止污染，要用柱切割器除去柱两端各2-4厘米，并保持切口平整。再按照不同的色谱仪要求伸进进样口、检测器合适的长度，拧紧螺丝。注意螺丝不要拧太紧，防止挤碎石墨密封垫，堵塞进样口。 ?安装柱子时注意不要把柱子的任何部位和柱温箱接触，以免造成柱子损伤。 ?切勿在没有通载气的情况下使用柱子，防止固定液流失、氧化。 ?切勿在使用中实际温度超过柱子的最高使用温度，一般要低于柱子的最高使用温度20℃以下。 从仪器上取下的气相色谱柱应放入其相对应的盒子中，把隔垫插在柱子两端，要避免碎屑进入柱子，并放到原来的储存柜中。 流动相-载气 检测器种类 载气 （纯度） 燃烧气 （纯度） 助燃气 （纯度） 尾吹气 （纯度） TCD He N2 Ar等 99.995%以上 H2 等 99.995%以上 Ari 空压机 He N2 Ar等 99.995%以上 FID N2 He 等 99.995%以上 H2 等 99.995%以上 Ari 空压机 N2 He 等 99.995%以上 ECD N2 He 等 99.998%以上 H2 等 99.998%以上 Ari 空气钢瓶 空压机也可 N2 He 等 99.999%以上 载气的要求 气体钢瓶使用注意事项 钢瓶应有专用的钢瓶柜放置 放置条件：通风条件好，避免光照 温度40度以下，禁止烟火，有相应的消防器材 工作前检漏 每3个月检查钢瓶及减压阀 使用无油减压阀 气体发生器使用事项应参见相应的说明书 GC-检测器 检测器特性 浓度型检测器： 测量的是载气中通过检测器组分浓度瞬间的变化，检测 信号值与组分的浓度成正比。 常见：如热导池检测器，电子捕获检测器 质量型检测器： 测量的是载气中某组分进入检测器的速度变化，即检测信号值与单位时间内进入检测器组分的质量成正比。 常见：氢火焰检测器，火焰光度检测器。 常见问题分析与解决 HPLC常见问题与分析 GC常见问题与分析 这两方面入手来分析： 从仪器现象 从色谱图与数据上 故障特征 1. 色谱峰展宽 2. 压力升高 相应的对策 1. 用配套的螺丝、金属箍和毛细管 2. 连接进样器和色谱柱之间的管道 (柱外死体积)应尽可能地短 螺丝、金属箍和毛细管故障 HPLC 常见问题 死体积 连接螺丝包括一个螺母和一个套在毛细管上的金属箍；它们必须和完全匹配 当完全匹配时，毛细管的顶端将和仪器或柱子的端口恰好吻合，而不至于形成死体积 死体积会导致出现肩峰和双重峰 注意： 不同生产厂家的螺丝和金属箍是不能通用的。 溶剂纯度的影响 溶剂中的杂质会导致出现“鬼峰”，特别是梯度洗脱时 注意： 只能使用色谱级的溶剂! 不能使用旧的或未经过滤的缓冲溶液 溶剂混合产生的问题 流动相中所使用的不同溶剂必须互溶 注意： 过高浓度的磷酸盐缓冲溶液可能会在有机溶剂中析出 流动相中溶剂不互溶会导致: 1. 基线漂移， 2. 保留时间的重现性差， 3. 出现肩峰和“鬼峰”的问题. 样品的溶解 样品应该溶解于流动相中，如果样品在流动相中的溶解性实在太差，则应将进样体积降到很低(如1 ul) 选用不合适的溶剂溶解样品可能会导致 保留时间的重现性差，肩峰、双重峰和 “鬼峰” 故障特征 “鬼峰”(由已被污染的过滤头造成) 保留时间不断改变(由于过滤头堵塞或部分堵塞) 清洗步骤： 1. 水 2. 稀硝酸 3. 水 4. 异丙醇 5. 水 (超声波清洗) 流动相过滤头产生的问题 进样量 进样量过大会导致峰形不对称以及保留时间变短的问题 通常引起色谱柱过载或超出检测器的检测限是由于样品浓度过高而不是体积的问题 过大的进样体