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使用QPix400 系统通过荧光筛选细菌克隆 通过荧光报告基因筛选含有目的基因的细菌转化子 比传统的方法更加方便高效。在研究蛋白折叠或分泌、 酶的进化或者蛋白定位的时候，通过荧光成像和筛选可 以定量单个克隆的独特信息。此外，这也是一个直接筛 选突变或者识别报告基因的方法。 传统的手工挑取微生物克隆是一个费时烦人且易出错的过程。QPix400 系 优势 列微生物克隆筛选系统一小时可以完成3000 个克隆的挑取，而一个熟练的人  荧光定量筛选能够客 工只能挑取约600 个克隆。自动化系统的速度相比人工提高了至少5 倍，最 观有效地筛选感兴趣 关键的是更加准确，有效性98% 。QPix400 系列的荧光成像模块可以显著减 的克隆 少下游的工作量，因为通过对荧光蛋白表达的定量，实现了有目的性筛选，  多组荧光通道增加试 确保只挑感兴趣的克隆。QPix 已成为市场上微生物克隆筛选系统的领导者， 验的灵活性 它可以提供多组荧光滤光片，兼容大多数的荧光克隆载体。基于荧光的重组  易于使用的软件，随 克隆筛选方法使重组基因表达的筛选更加容易，提供了一个更加准确的筛选 时根据试验自定义筛 方法。 选参数，确保每一次 都能挑到需要的克隆 这里，我们描述了QPix400 系统基于荧光的克隆筛选功能。使用的微生 物是Escherichia coli ，转化有表达GFP 或者CFP 的重组质粒。 材料和方法 pFluoroGreen 质粒：Amp 抗性，携带GFP 基因。转化质粒到E. coli.，然后使用含有IPTG 和 Amp 的LB 平板过夜培养。 pCyanFP 质粒：Kan 抗性，携带CYP 基因。同样转化到E. coli.，然后过夜培养。两个质粒的 图谱如Figure 1A 和1B 所示。 白光和荧光成像筛选克隆 使用QPix420 系统，分别在白光（Figure 2A ）和荧光下（Figure 2B ）对GFP 转化的细菌克隆 进行成像；选择蓝色滤光片组（Ex/Em filter: 457/536 nm ）基于荧光对GFP 表达的克隆进行筛选。 QPix 系统可以根据白光和荧光图片识别克隆，并根据荧光报告基因的表达水平客观选取感兴 趣的克隆。成像完成后，QPix 软件检测分析每个克隆的数据，并识别每个克隆在培养板上的位 置。软件的灵活性允许使用者自定义克隆的筛选参数，比如大小，边缘形状，形态等；还可以自 定义荧光定量参数，比如设置荧光强度阈值，指定感兴趣克隆的蛋白表达水平。根据客户自定义 的筛选参数，软件选取要挑取的克隆。然后，系统通过96 通道气动挑头高精度自动化完成克隆 挑取。对于这次试验，根据内部平均荧光强度进行筛选，大于40000 的GFP 表达克隆被选取。 请参考Figure 3A 和3B 查看被选取以及未被选取的克隆。 Figure 1. (A) PFluoroGreen 质粒 载体图谱 (B) pCyanFP 质粒图