核酸的生物合成A.pptVIP

蛋白质 第十章 核酸的生物合成 Biosynthesis of Nucleic Acid DNA复制的回环模型 逆转录病毒的生活周期 三、DNA的人工合成 化学方法合成 逆转录酶 PCR反应 在大肠杆菌中的错配修复系统已经研究得十分透彻了。这个系统主要包括酶错配矫正酶（mismatch??correction??enzyme）、DNA聚合酶Ⅲ和DNA连接酶等11种蛋白参与。可以分为步骤：启始、切除和修复。 二、逆转录 (reverse transcription) 逆转录酶 逆转录酶的发现 美国 的Temin和Baltimore于1970年在鸡肉瘤中发现了逆转录酶，发展了中心法则。于1975年获得诺贝尔奖。 逆转录酶 (reverse transcriptase) 三种活性: RNA作模板的dNTP聚合活性; RNase H活性; DNA作模板的dNTP聚合活性. 逆转录病毒细胞内的逆转录现象 RNA 模板 逆转录酶 DNA-RNA 杂化双链 RNA酶 单链DNA 逆转录酶 双链DNA 逆转录酶 A AA A T T T T AAAA SI核酸酶 DNA聚合酶Ⅰ 碱水解 T T T T 分子生物学研究可应用逆转录酶，作为获取基因工程目的基因的重要方法之一，此法称为cDNA法。 以mRNA为模板，经逆转录合成的与mRNA碱基序列互补的DNA链。 试管内合成cDNA cDNA ?complementary DNA? 逆转录研究的意义 逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中的重大发现。 逆转录现象说明：至少在某些生物，RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能。 对逆转录病毒的研究，拓宽了20世纪初已注意到的病毒致癌理论。 DNA Damage and Repair 第二节 DNA损伤与修复 遗传物质的结构改变而引起的遗传信息改变，均可称为突变。 DNA损伤(DNA damage)有可能造成突变。 从分子水平来看，突变就是DNA分子上碱基的改变。 一、突变 （一）突变的意义 突变是进化、分化的分子基础 突变导致基因型改变 突变导致死亡 突变是某些疾病的发病基础 （二）引发突变的因素 物理因素 紫外线(ultra violet, UV)、各种辐射 UV 化学因素 DNA自发变化 （三）突变的分子改变类型 置换 (replacement) 缺失 (deletion) 插入 (insertion) 重排 (rearrangement) 框移 (frame-shift) DNA分子上的碱基错配称点突变(point mutation)。 发生在同型碱基之间，即嘌呤代替另一嘌呤，或嘧啶代替另一嘧啶。 1. 转换 发生在异型碱基之间，即嘌呤变嘧啶或嘧啶变嘌呤。 2. 颠换 A、置换 镰形红细胞贫血病人Hb (HbS) β亚基 N-val · his · leu · thr · pro · val · glu · · · · · · C 肽链 CAC GTG 基因 正常成人Hb (HbA)β亚基 N-val · his · leu · thr · pro · glu · glu · · · · · · C 肽链 CTC GAG 基因 拓扑异构酶Ⅰ 拓扑异构酶Ⅱ 拓扑异构酶的功能及作用特点 松弛正超螺旋，变为负超螺旋; 既能水解 、又能连接磷酸二酯键。 拓扑异构酶分类 拓扑异构酶Ⅰ 切断DNA双链中一股链，使DNA解链旋转不致打结；适当时候封闭切口，DNA变为松弛状态。反应不需ATP。 拓扑异构酶Ⅱ 切断DNA分子两股链，断端通过切口旋转使超螺旋松弛。 利用ATP供能，连接断端， DNA分子进入负超螺旋状态。 作用机制 1、复制的起始 需要解决两个问题： a. DNA解开成单链，提供模板。 b. 合成引物，提供3?-OH末端。 (三)、原核生物的DNA生物合成 DNA解链 origin E.coli复制起始点 oriC GATTNTTTATTT ··· GATCTNTTNTATT ··· GATCTCTTATTAG ··· 1 13 17 29 32