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单细胞送样建议 文件编号： SOP-SMM-016 版本号： A1 生效日期： 2016-10-31 仅限华大基因内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。 单细胞送样建议 文件编号：SOP-SMM-016 版本号：A1 第1 页共7 页 目录 第一章 动物单细胞/微量细胞自行分选建议 2 1 单细胞重测序 2 1.1 样品要求 2 1.2 样品准备 2 2 单细胞全基因组甲基化 2 3 单细胞转录组/RNA-SEQ (SMART-SEQ Ⅱ) 3 3.1 样品要求 3 3.2 样品准备 4 4 样品打包及寄送 4 5 细胞分选的环境及操作要求 4 第二章 口吸管法分离单细胞的送样建议 6 1 细胞系样品 6 2 血液细胞样品 6 3 组织样品 7 4 样品处理其他说明 7 仅限华大基因内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。 单细胞送样建议 文件编号：SOP-SMM-016 版本号：A1 第2 页共7 页 第一章 动物单细胞/微量细胞自行分选建议 1 单细胞重测序 1.1 样品要求 主要针对人和小鼠样品。若为其他物种，需要提供对应物种看家基因检测引物。 1.2 样品准备 1.2.1 将细胞分选至装有3～5μL PBS 缓冲液的200μL PCR 管中，每管细胞数目不得超过 1000 个。不建议另外加入其他细胞保护剂，如有特殊情况，加入其他试剂或者经过其他处理， 请在样品信息单中备注。 1.2.2 细胞分离完成后，请于10 分钟内放入-80℃冰箱或者干冰保存。可暂存于-20 ℃，但 保存时间不得超过3 小时。 1.2.3 每个细胞样品建议送3 管重复，以保证后续实验成功率。例如：需测序某一细胞样品 数为5 个，则建议送样细胞样品数为15。 1.2.4 除提供细胞样品外，建议每批次提供一个阴性对照，即在PBS 缓冲液中加入0.1~0.5μL 的1% PBS-BSA 溶液（分选细胞时，细胞保存溶液）。 表1. 单细胞重测序送样要求 测序类型 WGS WES 样品类型 单细胞 1-2 个（4μL PBS 溶液） 1-2 个（4μL PBS 溶液） 微量细胞 2≤X≤1000 （4μL PBS 溶液） 2≤X≤1000 （4μL PBS 溶液） 注：X 为细胞数目 2 单细胞全基因组甲基化 2.1 样品准备 2.1.1 单细胞甲基化裂解液由华大配制并提供，请联系当地销售人员获取。 2.1.2 11μL 裂解液存于200μL PCR 管中，收到后请-80℃保存。 2.1.3 取出裂解液，置于冰上融化。 2.1.4 挑取单细胞至裂解液中