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DNA的生物合成总结 一、 DNA复制的特点 1、DNA的半保留复制 半保留复制（semiconservative replication）：DNA复制时，每一条DNA链在新链合成中充当模板，按碱基配对方式形成两个新的DNA分子，每个分子都含有一条新链和一条旧链。 生物学意义： DNA的半保留复制表明了DNA在代谢上的稳定性，保证亲代的遗传信息稳定地传递给后代。 2、有特定的复制起点和方向 复制是一个高度协调的过程，母链解链和复制同时进行。 起点（origin，ori）：复制起始部位的一段核酸序列，控制复制的起始。 终点（terminus）：终止DNA复制的一段核酸序列。 复制子（replicon）：基因组中能独立进行复制的单位（复制起点到终点的核酸片段）。原核生物只有一个复制子；真核生物含多个复制子，多个起点和终点，形成多个 “复制眼”或“复制泡”。 复制方向：大多为双向对称复制，也有单向(不对称)复制；新生DNA链的合成方向为：5’→3’。 3、半不连续复制 DNA的半不连续复制（semidiscontinuous replication）： 前导链的连续复制和后随链的不连续复制方式。 冈崎片段（Okazaki fragment）： 1968年冈崎发现，在不连续的后随链DNA合成中形成的DNA短片段；在原核生物有1000～2000核苷酸，真核生物约100～200核苷酸。 4、需要引物 引物(primer)：和模板链互补的线性核酸小片段，其上带有能与核苷酸相结合的游离3′-OH，通常是寡聚RNA。 二、DNA复制的条件 1、底物 四种脱氧核糖核苷酸，即dATP，dGTP，dCTP和dTTP。 2、模板 模板（template）： DNA复制时解开的两股亲代DNA链；DNA复制是模板依赖性的。 3、引发体和RNA引物 4、DNA聚合酶 1） DNA聚合酶（DNA polymerase，DNA-pol）：催化依赖于DNA模板的由脱氧核苷三磷酸前体合成DNA的酶。 2） DNA聚合酶的作用特点 4种dNTP底物（dATP、 dGTP、dCTP和dTTP）； 接受模板指导； 需引物提供3′-OH； 新链生长方向： 5′→3′； 产物DNA的性质与模板相同； DNA复制过程中还需其它酶和蛋白质因子。 5、DNA连接酶 DNA连接酶（ligase）：催化两段DNA片段之间磷形成酸二酯键，而使两段DNA连接起来，不能将两条游离的DNA单链连接起来。 6、单链DNA结合蛋白 单链DNA结合蛋白（single strand binding protein，SSB）：一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。 作用：维持单链状态，防止复性；对抗核酸酶水解，保护单链完整。 7、解旋酶 解旋酶（unwinding enzyme）：又称解链酶（helicase），是用于解开DNA双链的酶蛋白，每解开一对碱基需消耗两分子ATP。 8、拓扑异构酶 拓扑异构酶（topoisomerase）Ⅰ：可使DNA双链中的一条链切断，松开双螺旋后再将DNA链连接起来，其作用是松解负超螺旋，同转录有关。反应无需供给能量。 拓扑异构酶Ⅱ：切断DNA双链，使DNA的超螺旋松解后，再将其连接起来。 三、原核生物DNA复制的过程 1、预引发 解旋解链，形成解旋复合物：DnaA蛋白识别复制起始点形成起始复合物，在其他蛋白、拓扑异构酶和解旋酶作用，使DNA的超螺旋及双螺旋结构解开，碱基间氢键断裂，形成两条单链DNA。形成叉状结构。 引发体组装：SSB结合在两条单链DNA上，与其他蛋白因子及引物酶一起组装引发复合物。 引发：在引物酶的催化下，以DNA为模板，合成一段短的RNA片段，获得3端自由羟基（3-OH）。 2、复制的延伸 由DNA聚合酶Ⅲ催化，以3’→5’方向的亲代DNA链为模板，从5’→3’方向聚合子代DNA链。 引发体移动：引发体向前移动，解开新的局部双螺旋，形成新的复制叉，后随链重新合成RNA引物，继续进行链的延长。 前导链的延长： DNA pol Ⅲ全酶二聚体的一个亚基与前导链的模板结合而发挥催化作用，与复制叉前进的方向同向。 后随链的延长：DNA pol Ⅲ全酶二聚体的另一半与后随链的模板结合发挥催化作用。 后随链合成片段也沿5′→3′方向延长，模板成环状才能与酶催化时向前移动的方向一致。 后随链片段合成接近上一后随链片段的5′末端时，模板被释放，环消失。继续重复，连续进行。 3、复制的终止 细菌环状染色体的两个复制叉向前推移，在终止区相遇而停止复制，复制体解体。 4、DNA复制的保真性 为了保证遗传的稳定，DNA的复制必须具有高保真性。 维持DNA复制准确性的因素： 1） 外因：四种dNTP要平衡；Mn2+和Mg2+的比例、浓度（酶活）。 2） 内因： 按碱基配对原