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高二生物学案 专题五 DNA和蛋白质技术 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 【课题目标】 1、了解PCR技术的基本操作 2、理解PCR的原理 3、讨论PCR的应用 【课题重点】 PCR的原理和PCR的基本操作 【课题难点】 PCR的原理 【自学引导】 基础知识 多聚酶链式反应是一种????????? 迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的????????? 为模板，在几小时内复制出上百万份的????????? 。通常将DNA的羟基(－OH)末端称为????????? 端，而磷酸基团的末端称为?????????? 端。（）引物是一小段?????????? ，它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。用于PCR的引物长度通常为20～30个核苷酸。它的作用是：DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。 （）DNA的合成方向 当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的?????????? 端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的????????? 延伸。（）DNA的变性与复性 在80-100的温度范围内，DNA的????????? 结构将解体，双链分开，这个过程称为??。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链，这个过程称为????????? 。 （）PCR对DNA双链的解聚与结合控制 PCR利用了DNA的原理，通过控制来控制双链的解聚与结合。 （）TaqDNA聚合酶的应用 （）PCR扩增DNA的基本条件：DNA??????????? ，分别与两条模板链相结合的??????????? 。四种?????????? ，???? ?酶，同时通过控制温度使DNA复制在反复进行。 变性：在95℃时DNA 复性：在50℃时 与DNA 结合 延伸：在72℃时合成DNA子链（两个引物间的序列） 从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由延伸而成的DNA单链会与结合，进行DNA的延伸。这样，DNA聚合酶只能特异地复制处于的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。 做PCR通常使用??????????????????? ，它是一种薄壁塑料管，总容积为。具体操作时，用微量移液器向微量离心管中依次加入各组分，再设计好PCR仪的循环程序就可以了。如果没有PCR仪，可以设置??????????????????? ，温度分别为94、55和72，然后按照上表的要求，在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管即可。PCR的突出优点是????????? 、?????????? 、??????????? 和易于操作。 3 延伸 复性 变性