[理学]高效液相色谱分析技术.pptVIP

高效液相色谱分析技术(HPLC) 一、基本原理 Basic principle 二、故障诊断 HPLC System Troubleshooting 三、日常维护 HPLC System Maintenance HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。 按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以作如下的分类： 分配色谱：—— 分配系数 亲和色谱：—— 亲和力 吸附色谱：—— 吸附力 离子交换色谱：—— 离子交换能力 凝胶色谱（体积排阻色谱）：——分子大小而引起的体积排阻 分配色谱又可分为： 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。 用的最多，约占60～70％。 固定相又分为两类： ①一类是使用最多的微粒硅胶； ②另一类是使用较少的高分子微球 ; 优点是强度大、化学惰性、使用pH范围大 (pH=1～14)； 缺点是柱效较小，常用于离子交换色谱和 凝胶色谱。 微粒硅胶占所有柱填料的80％,它是近代高效液相色谱技术中最重要的柱填料类型。 按键合到微粒硅胶基质上的官能团可分为： ⑴正相柱：填料为极性，官能团为－CN、－NH2等 ⑵反相柱：填料为非极性，官能团为烷烃，例如：C18(ODS)、C8、C4等。 流动相： 1.正相色谱常用的流动相及其冲洗强度的顺序是： 正己烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜异丙醇 2. 反相色谱最常用的流动相及其冲洗强度如下： H2O＜甲醇＜乙腈＜乙醇＜丙醇＜异丙醇＜四氢呋喃 最常用的流动相组成是：“甲醇—H2O”和“乙腈—H2O”，由于乙腈的剧毒性，通常优先考虑“甲醇—H2O”流动相。 流动相的选择原则是： ①样品易溶，且溶解度尽可能大 ②化学性质稳定，不损坏柱子 ③不妨碍检测器检测，紫外波长处无吸收 ④粘度低，流动性好 ⑤易于从其中回收样品 ⑥无毒或低毒，易于操作 ⑦易于制成高纯度，即色谱纯 ⑧废液易处理，不污染环境 HPLC 的组成 Pump 泵 Injector/Autosampler 进样器/自动进样器 Column 色谱柱 Detector 检测器 Data System/Integrator 数据系统/积分仪表 All of these components can have problems and require troubleshooting. 所有这些部件都可能出现故障而需要检修。 HPLC出现故障可以从多方面入手 1.从部件的运转情况推测，如压力、流速的变化 2.从色谱图的异常情况推测，如出峰时间、峰形 3.从数据结果中分析 1.从压力变化判断（ Pressure） 压力无 压力高 压力低 压力不稳定 2. 从色谱图的异常情况推测 基线漂移、噪声 峰形异常（前沿、拖尾、变宽、分叉、无峰、负峰、鬼峰） 保留时间变化 3. 从数据结果中分析 温度：10～30℃；相对湿度80％； 最好是恒温、恒湿，远离高电磁干扰、高振动设备，有良好的通风设施。 HPLC的日常维护与保养 六通阀进样器的使用及保养 泵的保养 柱的保养 紫外灯的保养 工作原理 手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出； 将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。 手柄转动要快速：手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。 样品必须过滤，样品溶液均要用0.45(0.22)μm的滤膜过滤,防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。 进样结束冲洗进样器：通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。 泵的保养： 使用流动相尽量要清洁 进液处的砂芯过滤头要经常清洗 流动相交换时要防止沉淀 避免泵内堵塞或有气泡 每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染 柱的保养： 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动