[生物学]蛋白质2.pptVIP

3、蛋白质一级结构的测定 蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的一级结构以来，现在已经有上千种不同蛋白质的一级结构被测定。 （一）、蛋白质测序的策略 1 .确定蛋白质的纯度在97%以上（艰难的工作）。 2 .测定多肽链的数目（N-、C-）。 3 .拆分多肽链（包括-S-S-键）。 4 .分析每一条多肽链的氨基酸组成（种类、数量）。 5.鉴定多肽链的N—末端和C—末端氨基酸残基。 6.用两种以上方法裂解多肽链成较小的肽段。 7.测定各肽段的氨基酸序列。 8 .拼接各肽段成完整的多肽链。 9.确定二硫键的位置。 牛胰岛素一级结构 牛胰岛素的分子量为５７００道尔顿，分子中含有两条多肽链，一条称Ａ链（含２１个残基）另一条称Ｂ链（含３０个残基），三对二硫键，两对链间，一对链内。 4、一级结构改变引起的分子病： 如：镰刀型贫血病血红蛋白仅一级结构： β6Glu换成β6Val 由此引起三级结构多一疏水键，四级结构发 生线性缔合，导致红细胞发生溶血。 蛋白质分子结构与功能的关系 正常型 ---Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Lys --- β链 谷氨酸 镰刀型 ---Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Lys --- β链 缬氨酸 谷A（极性） 缬A（非极性） (了解)由于缬氨酸上的非极性基团与相邻非极性基团间在疏水力作用下相互靠拢，并引发所在链扭曲为束状，整个蛋白质由球状变为镰刀形，与氧结合功能丧失， 导致病人窒息甚至死亡. 二、蛋白质的空间结构 1、定义 蛋白质分子中所有原子在三维空间的分布和肽链的走向 方法：X射线衍射法，核磁共振法 2、空间结构中的作用力 次级键（氢键、盐键）、疏水作用、范德华力 二、蛋白质的二级结构 蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象 。 1、定义 2、主要的化学键： 氢键 （稳定因素） 蛋白质二级结构的主要形式 ?-螺旋 ( ? -helix ) ?-折叠 ( ?-pleated sheet ) ?-转角 ( ?-turn ) 无规卷曲 ( random coil ) （一） ?-螺旋（最常见的结构） ?-螺旋结构要点: ①多肽链主链围绕中心轴形成右手螺旋，侧链伸向螺旋外侧。 ②每圈螺旋含3.6个氨基酸，螺距为0.54nm。 ③每个肽键的亚氨氢和第四个肽键的羰基氧形成的氢键保持螺旋稳定。氢键与螺旋长轴基本平行。 ④α-螺旋有左手螺旋和右手螺旋两种，天然蛋白质的α-螺旋绝大多数都是右手螺旋，仅在嗜热菌蛋白酶的晶体结构中发现左手螺旋。右手螺旋较稳定。 （三）?-折叠（由Pauling,Corey1951年提出） ①多肽链充分伸展，相邻肽单元之间折叠成锯齿状结构，侧链位于锯齿结构的上下方。 ②两段以上的β -折叠结构平行排列 ，两链间可顺向平行，也可反向平行 。 ③两链间的肽键之间形成氢键，以稳固β -折叠结构。氢键与螺旋长轴垂直。 β -折叠形成条件： 　要求氨基酸侧链较小。 （四）?-转角和无规卷曲 ?-转角（多见于球状蛋白） 1. 肽链内形成180o回折。 2. 在?-转角部分，由四个氨基酸残基组成 3.弯曲处的第一个氨基酸残基的 -C=O 和第四个残基的 –N-H 之间形成氢键，形成一个不很稳定的环状结构。这类结构主要存在于球状蛋白分子中。 ?-转角： 无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。 酶的功能部位多位于此构象中 无规卷曲：指没有一定规律的松散肽链结构 蛋白质构象与功能的关系 别（变）构作用：含亚基的蛋白质由于一个亚基的构象改变而引起其余亚基和整个分子构象、性质和功能发生改变的作用。因别构而产生的效应称别构效应。 血红蛋白是别构蛋白，O2结合到一个亚基上以后，影响与其它亚基的相互作用。 肌红蛋白 血红蛋白 在肺部O2的压力 在毛细血管中O2的压力 饱和度 0 0.5 1 20 40 60 80 100 120 O2压力 ?血红蛋白有两种构象: 紧张态—结合氧能力弱,存在大量离子键 松弛态—结合氧气能力强 , ?离子键破坏 第一个亚基与O2结合时，离子键的破坏较难，所需要的能量较多。 当血红蛋白的一个亚基结合氧之后引起它的构象从紧张态变成松弛态，其它的离子键也依次破坏，此时破坏离子键所需要的能量也