[生物学]酶与酶催化2012_618206434.pptVIP

* 一方面是温度升高,酶促反应速度加快。 另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。 因此大多数酶都有一个最适温度。 在最适温度条件下,反应速度最大。 * 一方面是温度升高,酶促反应速度加快。 另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。 因此大多数酶都有一个最适温度。 在最适温度条件下,反应速度最大。 * 一方面是温度升高,酶促反应速度加快。 另一方面,温度升高,酶的高级结构将发生变化或变性，导致酶活性降低甚至丧失。 因此大多数酶都有一个最适温度。 在最适温度条件下,反应速度最大。 * 工程学是将技术体系化的方法论，是抽象的一般化方法，往往表现为对数学的使用 工程思维：综合考虑定量性、实用性、预测性或者最优性、经济性、合理性、性能、效率以及产量、产率、转化率等因素的思维方法。 * 酶分子设计与修饰（理性设计、定向进化、分子修饰） 多酶反应 辅酶再生 分子设计与过程集成 * 蛋白样品 Km/μM kcat/s-1 kcat/Km 比酶活/(IU/mg) His-GFP-L1-MBP-L4-HepA 16.24±0.37 66.10±0.80 4.07 21.15±0.18 His-GFP-L2-MBP-L4-HepA 35.64±2.47 56.12±3.82 1.57 15.34±0.20 His-GFP-L3-MBP-L4-HepA 11.23±0.18 64.07±0.29 5.70 21.83±0.14 His-MBP-L2-GFP-L2-HepA 105.5±0.5 4.37±0.02 0.04 6.15±0.04 His-MBP-L2-GFP-L1-HepA 178.0±1.72 15.21±0.15 0.09 5.66±0.06 —表示无，氨基酸残基序列：L1为(GGGGS)3，L2为(EAAAK)3，L3为S3N10，L4为NS3N10LGIEGRISEFGS，n=3。 例：米氏方程参数的用途 影响均相酶反应速度的因素 使酶的活性降低或丧失的现象，称为酶的抑制作用。 能够引起酶的抑制作用的化合物则称为抑制剂。 酶的抑制剂一般具备两个方面的特点： a.在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相似。 b.能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳定的复合体或结合物。 添加物对酶活的影响 酶的抑制作用 添加物 添加物浓度 /mM 残余酶活 /% 对照 -- -- 100 巯基试剂 硫酸铜 1.0 18.75 硝酸银 1.0 12.50 还原剂 巯基乙醇 1.0 100 二硫苏糖醇 1.0 118.75 金属离子 氯化镍 1.0 2.50 硫酸锰 1.0 93.75 氯化锌 1.0 1.88 氯化钴 1.0 1.88 硫酸镁 1.0 118.75 表面活性剂 DTAB 1.0 43.75 Tween-80 1.0 137.50 例：不同添加物对NADH氧化酶活性的影响 不可逆抑制 添加物对酶活的影响 可逆抑制 可逆抑制：酶与抑制物之间形成非共价键结合的络合物时，抑制是可逆的。分为竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制。 E +S ES P + E k1 k-1 k2 ESI KIS + I EI+S KII + I 拟稳态假设; 物料平衡; 速度方程（作业） 添加物对酶活的影响 可逆抑制 E +S ES P + E k1 k-1 k2 ESI KII + I EI+S KIS + I KII=∞: 竞争性抑制 KII=KIS: 非竞争性抑制 KIS =∞ : 反竞争性抑制 添加物对酶活的影响 可逆抑制—竞争性抑制 E +S ES P + E k1 k-1 k2 + I EI+S KIS + I KII=∞: 竞争性抑制 KII=KIS: 非竞争性抑制 KIS =∞ : 反竞争性抑制 抑制物和底物结构相似 Km变大；Vmax不变 [I]非常大：底物和酶结合趋近于0 [S]增大：减弱或解除抑制作用 可逆抑制—非竞争性抑制 E +S ES P + E k1 k-1 k2 ESI KII + I EI+S KII + I KII=∞: 竞争性抑制 KII=KIS: 非竞争性抑制 KIS =∞ : 反竞争性抑制 抑制物与底物结构不相似 [I]增大：抑制作用增强 添加物对酶活的影响 可逆抑制—反竞争性抑制 E +S