第6章_色层分离法教材教学课件.ppt

第六章 色层分离法;色层分离法又称层析法或色谱分离法，它的最大特点是分离效率高，能把各种性质及相近的物质彼此分离。现代的色谱分离技术就是在此基础上发展而来的。 色层分离最早是由波兰植物学家M?茨维特提出来的。他在叶绿素的石油醚溶液流经装有碳酸钙的管柱时，发现碳酸钙对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，于是在管柱中出现了不同颜色的色谱带，因此称这种分离方法为色层分离法或色谱分离法。;层析法的发展史;层析分离图示 ;“层析的本质是使一种液体均匀地渗过一个相当细碎的物质的柱体，这些物质通过某种过程有选择地阻留了液体内的某些组分。” ——马丁（A. J. P. Martin）（英）;一、层析法的条件 层析法应具备的因素或条件是： 1. 具有两相 固定相——固定不动的一相 流动相——即携带样品流过固定相的流动体。 2. 混合物中各组分的物理化学性质有差异 3. 多次展开;二、层析法的分类;⑵ 根据操作技术的划分;⑶ 根据固定相的状态划分： ;⑷ 根据流动相的物态不同的分类 ;柱层析分离的基本原理示意图;一、吸附柱层析 1. 原理 吸附柱层析是利用吸附剂对混合试样各组分的吸附力不同而使各组分分离。 ;一、吸附柱层析;1、分配系数;一、吸附柱层析;一、吸附柱层析 2、吸附等温线 吸附等温线：某种组分在吸附剂表面的吸附规律。包括：线形和非线性。;（1）线性吸附等温线;洗脱曲线 若测定流出液中A的浓度，绘制C～V的曲线，则得到洗脱曲线（又叫洗提曲线）。为一对称的层析图谱 。;（2）非线性吸附等温线;Cs 固定相; 3. 吸附剂的选择;常用吸附柱介质;（1）Al2O3（中性、酸性、碱性）;II） Al2O3的活性 活度级I～Ⅴ级增强 吸附能力 I～Ⅴ 减弱 在不同的温度下活化氧化铝： 加热至 100～150℃ 活化有一定活性 ﹥150℃ Ⅱ～III级 300～400℃ IV～VI ﹥600℃ 脱水开始烧结 每一批Al2O3表面积和表面孔结构不一致，活性不同 一般，分离极性较强的组分用活性弱的吸附剂；???离弱极性的组分用活性强的吸附剂。;（2）硅胶;（3）聚酰胺;由海洋生物琼脂提取得到的主要成分 ①中性不带电 ②水溶性线状多糖 ③高亲水性，含大量羟基 ④能制成多孔性凝胶，分离大分子 制备： ① 去除带电琼胶成分 ②将溶化的琼脂糖采用悬浮,乳化或喷珠的方法制 得珠状介质。 ③采用交联剂增加介质的机械强度;（5）葡聚糖 ;（6）纤维素;性质： （1）丙烯酰胺与交联剂N, N’-甲叉双丙烯酰 胺共聚。 （2）烷烃骨架与酰胺侧链 （3）控制交联剂比例可控制网格孔度 （4）亲水好，但不如多糖介质 (5) 机械强度差 应用：（1）凝胶过滤 （2） 电泳介质;4、流动相及其选择; 烷烃（—CH3 ，—CH2 —） ﹤烯烃（—CH= CH—） ﹤醚类（—OCH3，—OCH2—） ﹤硝基化合物（—NO2） ﹤二甲胺 ﹤酯类（—COOR）﹤酮类（ C=O） ﹤醛类（—CHO） ﹤硫醇（—SH） ﹤胺类（—NH2） ﹤酰胺 ﹤醇类（—OH） ﹤酚类（Ar—OH）﹤羧酸类（—COOH）;（3）常用流动相极性： 石油醚﹤环己烷﹤二硫化碳﹤CCl4﹤三氯乙烯﹤苯﹤甲苯﹤二氯甲烷﹤氯仿﹤乙醚﹤乙酸乙酯﹤乙酸甲酯﹤丙酮﹤正丙醇﹤乙醇﹤甲醇﹤吡啶﹤酸 在某些情况下可用混合流动相 聚酰胺柱层析可采用水溶液：乙醇水溶液，丙酮水溶液等 溶解试样用的溶剂极性应与流动相相近; 5. 洗脱方法及流出曲线 ⑴ 有色物质分离的洗脱方法 推出法：有色物质分离后，将吸附剂从柱中推出，用刀按层切开，分层洗脱再定量。 ⑵ 无色物质分离的洗脱方法及流出曲线 无色物质分层后，可采用流出曲线加以判断。 流出曲线：以物质浓度为纵座标，以收集的洗脱液体积为横座标，得出的曲线。 ;柱层析的洗脱方法 ;恒定洗脱 ;分 步 洗 脱 ;梯 度 洗 脱 ;洗脱剂的选择;二、分配柱层析; 二、分配柱层析; 2. 固定相与流动相 ⑴ 固定相：由载体和一种溶