第8章_霉菌毒素的检测教材教学课件.pptVIP

第八章 霉菌毒素的检测 第一节 黄曲霉毒素的检测 黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构和性质相近的化合物，现已分离鉴定出20种以上。 难溶于水、乙醚、石油醚等，易溶于甲醇、三氯甲烷、苯、乙腈等。 在紫外线照射下可发出荧光。 在强酸性和碱性溶液中不稳定，对氧化剂也不稳定。 TLC法检测定位和定性 TLC法的确证检测 样品加正己烷和甲醇-水（55+45）振荡提取 取甲醇-水层，用三氯甲烷萃取 三氯甲烷层用无水硫酸钠脱水、过滤 滤液水浴挥干、冷却，用苯-乙腈（98+2）溶解残渣作点样液 样品处理 测定 定性 1.检查AFTB1 2.检查AFTB2a 365nm，Rf值0.6，蓝紫色荧光点 加TFA水解AFTB1， Rf值0.1 定量 以0.04μg/ml 的AFTB1标准使用液10 μl作定量基准，样品液稀释到此浓度（荧光强度相当）进行计算 最低检出量法 基本原理 采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，通过酶与底物产生颜色反应进行定性与定量。抗原或抗体均可作为测定的对象。 酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay) 是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。 固相的抗原或抗体 1 3种必要的试剂 方法特点 具有操作简单，分析通量大、快速，特异性强，分析灵敏度高等特点。 酶标记的抗原或抗体 2 酶作用的底物 3 5 试剂盒 4 酶标板 3 洗板机 2 酶标仪 1 移液器 【主要仪器与试剂】 样品用乙腈-水（50+50）（碳酸盐缓冲液调pH至8.0）振荡提取 过滤，滤液用0.1%的BSA洗液稀释 包被抗原包被酶标板，4℃过夜后洗去多余抗原 加样品后，加抗AFTB1单克隆抗体，37℃孵育后，洗去多余抗体 加辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG ，37℃孵育后，洗去多余抗体 加底物四甲基联苯胺溶液， 37℃孵育后硫酸终止反应 酶标板 包被抗原 AFTB1 AFTB1单克隆抗体 辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG 底物 杂质成分 酶标板 第二节 赭曲霉毒素A的检测 赭曲霉毒素是一类化学结构和性质相近的化合物，现已分离鉴定出4种，其中赭曲霉毒素A（OTA）是最主要的。 微溶于水、石油醚，酸性条件下溶于苯、三氯甲烷和稀碳酸氢钠溶液，碱性条件下成盐并溶于水；在紫外线照射下会分解。 样品加三氯甲烷和0.1mol/L磷酸振荡提取后过滤 滤液加碳酸氢钠溶液振荡萃取 取水层用稀盐酸调pH2-3，加三氯甲烷萃取 取三氯甲烷层水浴挥干，用苯-乙腈（98+2）溶解残渣作点样液 样品处理 * *