[农学]食用菌选修课.pptVIP

多孢分离法——钩悬法 多孢分离法——褶上涂抹法 5. 培养 6. 转管 25℃，恒温培养。 待菌丝长至1cm，转管。培养7~10天。 1. 种菇的选择和消毒； 2. 用手术刀将菌柄与菌盖交界处的组织切成大米粒大小的小块； 3. 接种 将组织块接到斜面中心略偏试管底部处； 4. 培养 5. 转管 二、组织分离法 1. 菇木的采集 2. 菇木的消毒并去掉树皮 3. 将菇木切成大米粒大小的小块 4. 将菇木小块接到斜面中心略偏试管底部处； 5. 培养 25℃，恒温培养。 6. 转管 待菌丝长至1cm，转管。培养7~10天。 三、菇木分离法 土中菌丝分离：食用菌种类很多，许多土生的食用菌；孢子不易萌发。组织分离也不易成功，用土中菌丝分离获得纯种的方法，叫土中菌丝分离。　　由于土中菌丝体的周围生活着多种多样的土壤微生物，因此分离时必须尽可能避开这些微生物的干扰，尽可能批取清洁菌丝素的尖端、不带杂物的菌丝接种，反复用无菌水冲洗，在培养基中加入一些抑制细菌 生长的药物，如 40微克／升的链霉素或金霉素。如发现感染细菌，可以把菌落边缘的菌丝挑出来，接种到木屑培养基中。因细菌没有分解木质素的能力，因此在木屑培养基中不易扩展；只局限于接种处。待菌丝长出感染区后，就可以再进行扩大提纯了。 子实体基部分离：从瓶栽、袋栽或大床栽培的子实体基部分离出新菌丝的方法，叫子实体基部分离，以袋栽银耳为例说明： 　　从出耳早、无病虫害的栽培室中；选择生活力最强的幼耳5袋，移到气候温和，有散射光的野外场所进行后期培养，以增强菌丝体的生活力。经培养7～10天后，待子实体直径达4～5厘米时便可取回，作为分离的母体。再从中筛选最理想的一朵，用利刀割掉银耳子实体，放置于 0℃的冰箱或有敌敌畏的容器中过夜，以便杀死瓶中的害虫。然后用75％酒精或升汞擦洗耳基和袋子外边的杂质，连同接种工具、接种培养基等移进无菌室。 经灭菌后，用接种刀把袋口上部约15毫米厚的老菌根挖除，并进行培养。待袋口露出白色菌丝时，用接种针挑取一块半粒米大的白色菌结体，迅速移入母种试管培养基的中央，轻轻地脱去接种针， 塞上棉塞。 为了能够获得较多的母种，一次接种量要有100—200支试管，以便从中选择。分离后应及时移入22℃—24℃恒温箱或温室中培养。由于培养基内水分较多，菌丝恢复要比耳木分离得快。 经2-3天后，分离物的边缘就可看 到白色菌丝。每天要至少观察两次，以便提纯。观察、提纯方法与耳木分离法担同。经适温培养10-15天后，当接种块扭结团出现红、黄色水珠时，即可扩大原种。 第五节 菌种质量的鉴定和保藏 （1）镜检； （2）PDA培养基试验； （3）高温试验（35℃半天）； （4）菌丝生长观察（速度、密度）； （5）吃料观察； （6）产量试验及子实体质量观察。 一、菌种质量的鉴定 1. 母种质量的鉴定 2. 原种和栽培种的质量要求 （1）用转管5次以内的母种生产原种和栽培种； （2）室温下3个月的菌令；（举例：老化菌种）； （3）菌丝洁白、健壮、绒毛菌丝多； （4）无杂菌污染； （5）无黄水渗出。 二、菌种的保藏 1.传代培养保藏法 （1）斜面法——基本方法 ①菌种转接到适宜斜面上（最好用带帽的螺旋试管）； ②适温培养至菌体健壮； ③用油纸包扎好棉塞部分，4℃冰箱保藏； ④定期转管。 特点： ①简单易行，能随时观察，适宜短期保藏的菌种； ②保藏时间短，一般为2~4个月，需定期传代培养，容易污染，菌种易退化。 （2）液体石蜡法 长好斜面的菌种→加无菌液体石蜡→盖试管帽→直立4℃冰箱保藏。 特点： ①保藏时间一般为1~2年，不须经常转接； ②缺点是需直立，占空间大，不变于携带。 2. 冷冻保藏法 将菌种处于冷冻状态，使其代谢作用停止，理论上新陈代谢停止是-130℃，可无限期保藏。 低温会使细胞内的水分形成冰晶，速冻冰晶小而减小对细胞的损伤； 快速升温，可减少对细胞的损伤。 （1）原理： （2）冷冻保护剂 保护剂可提高存活率，如：甘油、二甲基亚砜、糊精、血清蛋白、脱脂牛奶等。 ①液氮保藏法：-196℃ ，需使用专用器具，适合专业保藏，理想的保藏方法； ② -70℃低温冰箱保藏法 ③ -20℃~-30℃普通冰箱保藏法 三、菌种的复壮 复壮是从衰退的群体中找出少数尚无衰退的个体。 1.