杂草抗药性检测方法教材教学课件.pptx

杂草抗药性检测方法 崔海兰 中国农业科学院植物保护研究所 cuihailan413@163.com 抗药性杂草的形成 ALS抑制剂： ACCase抑制剂： 其他除草剂： 1/100,000？ 1/1,000,000 ？ 1/10,000,000 ？ 激素类草甘膦： 1/100,000,000 ？ 除草剂选择压 Heap，2015 大穗看麦娘标本。此标本于1876年5月在 俄国的葡萄园内采集而来，保存在日内 瓦的植物公园内（瑞士）。这个标本为 Alopecurusagrestis，是A. myosuroides （大穗看麦娘）以前的名称 样本：734个；DNA提取不成功：49个；成功的：685个 在采集于1888年的一株大穗看麦娘内检测出除草剂抗性ACC酶 Leu1781等位基因（法国）。 1781突变生长更旺盛？ 低剂量下 Lolium rigidum快速形成抗药性 Neve and Powles (2005) Theor Appl Genet 抗药性形成影响因素 除草剂选择压（频度，剂量） 生态适合度 基因流（花粉….） 抗性基因型的初始频度 抗药性机理研究 靶标抗性 非靶标抗性 突变 过量表达 代谢 吸收、传导 隔离 靶标突变 除草剂 靶标酶 除草剂 靶标酶 靶标过量表达 除草剂 靶标酶 杂草对ACCase抑制剂的抗性 • 约48种抗性杂草 CT BCC BC TP BC: biotin carboxylase 生物素羧化酶 BCC: biotin carboxyl carrier 生物素羧基载体蛋白 CT: carboxyl transferase 羧基转移酶 质体 ACCase: 同质型：敏感 ACCase: 2000 aa 异质型：不敏感 ACCase 基因突变位点 标准参照：鼠尾看麦娘 A. myosuroides Powles and Yu, 2010 Ann Rev Plant biology Shiv Shankhar Kaundun Pest Manag Sci 2010; 66: 1249–1256 Lolium multiflorum 精噁唑禾草灵 APP 炔草酯 APP 烯草酮 CHD 唑啉草酯 PPZ 日本看麦娘对3类ACCase抑制剂的交互抗性模式 S 2027位 突变 1781位 突变 Cui et al., Weed Technology 2015 29:444–450 草甘膦抗性 cDNA分析；基因拷贝数是敏感的8倍，拷贝数和表达量呈现正相关； Palmer amaranth (Amaranthus palmeri) Gains et al. 2010 PNAS EPSPS gene amplification and glyphosate resistance 草甘膦抗性 一个多抗性案例：牛筋草同时抗glufosinate, glyphosate, paraquat and ACCase- inhibiting herbicides JALALUDINA, YU Q POWLES SB (2015). Multiple resistance across glufosinate, glyphosate, paraquat and ACCase-inhibiting herbicides in an Eleusine indica population. Weed Research 55, 82–89. 抗药性杂草检测方法 • 生物测定方法 §整株测定（盆栽） §种子测定法 §花粉管萌发法 §琼脂法 • 靶标抗性的快速分子检测 §测序 §PCR §PCR+酶切 §LAMP。。。。 种子采集、整理、保存 杂草抗药性水平检测 l 整株植物测定法（剂量反应曲线Dose response experiments） 通过整株杂草生物量对除草剂系列浓度的反应，建立剂量与生物量的关系， 以地上部生物量受药剂的抑制程度来评价其对除草剂抗性。 生长抑制中量 使杂草地上部鲜重比不用药处理降低50%的药剂剂量 计算抗性指数 敏感 抗性-1 抗性-2 抗性-3 Shiv Shankhar Kaundun Pest Manag Sci 2010; 66: 1249–1256 生物测定 20g a.i./ha苯磺隆用药后21天 MP11-3# 敏感 MP11-6# 抗 MP11-7# 抗 2（河北）/16（河北、山东、河南、陕西） 吡嘧磺隆20g a.i./ha为1倍剂量 0 1/64 1/32 1/16 1/8 1/4 1/2 1 2 4 8 16倍 生物测定 生物测定 杂草抗药性检测 l 种子生物测定法