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Medical Microbiologyexperiment Ⅱ ZHOU Hong 实验性质：综合性实验 实验内容： 1、简介实验室常用仪器设备　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2、空气、皮肤的细菌检查结果 3、细菌的生长现象及代谢产物观察 4、观察紫外线消毒灭菌结果　　　 5、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定（一） 　　　　　　　　　　　　　　 6、粪便中病原性肠道杆菌的分离鉴定（一） 革兰染色法 7、中草药、抗生素的抑菌试验 ※实验二、 葡萄球菌、肠道杆菌的分离鉴定 及细菌的药物敏感性试验 ※实验目的 1、掌握脓汁标本中葡萄球菌的分离鉴定方法。掌握革兰染色法。 2、熟悉常见病原性球菌的菌落和形态染色特点。 3、熟悉粪便标本中肠道致病菌的检验过程 ※一、微生物学实验室常用仪器设备 超净工作台 高压蒸汽灭菌器 过滤器 培养箱 ※二、空气、皮肤的细菌检查结果 1、记录空气微生物培养结果（要记录本人所在实验台的结果） 菌落大小、边缘、颜色、粗糙（光滑） 每立方米 层流洁净手术室： ≤ 10 普通手术室、无菌区： ≤ 200 2、记录皮肤微生物培养结果（要记录本人的实验结果） 比较消毒前后细菌菌落数，菌落特点。 液体培养基（沉淀、浑浊、表面生长） 金、柠、白葡萄球菌色素 甲、乙、丙链球菌溶血环特征 大肠与副伤寒杆菌致病性菌落特点 绿脓杆菌的水溶性色素观察 双糖含铁培养基动力、气体、硫化氢、乳糖分解观察 结核杆菌菌落特征的观察 三、细菌的生长现象及代谢产物观察（示教） 细菌的生长现象及代谢产物观察 混浊生长 菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照 菌膜生长 四、观察紫外线消毒灭菌结果　 ※五、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定（一） 1、 讨论分离鉴定程序： 标本——直接涂片染色镜检：典型葡萄球菌，可做初步诊断 ——分离培养——可疑菌落——直接涂片染色镜检 （血液琼脂平板） 血浆凝固酶试验 药敏实验 2、直接涂片染色镜检：球杆混合物、牙垢 3、分离培养：平板分区划线接种——37℃、24h 脓汁中葡萄球菌的分离鉴定 分区划线法 ※六、粪便标本细菌的分离培养鉴定 1、讨论程序 标本→分离培养（S-S培养基、EMB）→可疑菌落→增菌培养→ 涂片染色镜检。 初步鉴定（生化反应）→血清学鉴定（确定菌群和菌型） 药敏实验。 2、分离培养：接种于S—S培养基、EMB→37℃、24h ※革兰染色法 原理： 革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁差异（肽聚糖含量）；革兰阳性菌等电点比革兰阴性菌低。 实际意义： 鉴别细菌；选择抗菌药物；与细菌致病性有关 步骤： 结果： 革兰染色步骤 1.制片：取标本（球杆混合物、牙垢）涂片、干燥、固定 2.初染：结晶紫——1min——水洗 3.媒染：碘液——1min——水洗 4.脱色：95% 酒精——30s——水洗 5.复染：稀释复红——1min—水洗、滤纸吸干 6.油镜观察： 1、制片涂片、干燥、固定 2.结晶紫初染 1min——水洗 3. 碘液媒染 1min——水洗 * *