小鼠抗凝血酶ⅲ抗体at-ⅲ酶联免疫分析elisa.pdf

ELISA ELISA 小鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)酶联免疫分析（EELLIISSAA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆，组 织液及相关液体样本中抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)的活性。 实验原理： 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)水平。用纯化的 小鼠凝血酶Ⅲ抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入抗凝血酶Ⅲ抗 体(AT-Ⅲ)，再与HRP标记的凝血酶Ⅲ抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻 底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成 最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠抗凝血酶Ⅲ抗体(AT-Ⅲ)活性。 试剂盒组成： 试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存 说明书 1 份 1份 封板膜 2片（48） 2 片（96） 密封袋 1 个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：54U/ml 0.5ml×1瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂A液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 显色剂B液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液 （20ml×20 倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次 离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞 浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分 钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。