培养基筛选的利器设计designofexperimentdoe-sartorius.pdf

DOE - 培养基筛选的利器 实验设计(Design of Experiment, DOE) 自20 世纪初创以来，在产品设计、生产过程控制、质量 优化工程等方面得到了普遍的推广和应用。随着2005 年，FDA 对质量源于设计（Quality by Design，QbD ）概念的提出，越来越多的制药过程不仅采用DOE 提高实验效率，也通过其进 行质量和风险控制。 本文中主要介绍了DOE 中的混料设计（Mixture Design）在培养基混合筛选中的应用。 在传统的培养基筛选中，往往是将细胞株分别培养于3~10 种培养基，而后对目标产物的产 率，以及质量进行检测，从而来筛选适合的培养基。这种方法至今为止也是广泛使用的，然 而在某些情况下未必能够满足生产要求。在培养基筛选过程中，往往会发现细胞在某种培养 基中能够达到很高的细胞密度，然而 PCD 不高，而另外一种培养基，PCD 较高，细胞密度 较低。或者，一种培养基得到高产率，而另外一种得到高质量。在这样的状况下，培养基混 合很可能会是一个简单快捷的解决方案。 从工艺放大的角度，我们建议尽量不要将大于 3 种培养基，且选择同一品牌的培养基进行 混合。原因是在工艺放大后，培养基混合会使得操作复杂化，而如果混合的培养基为同一 品牌，在大规模生产中，可以采用培养基定制来解决这一问题。 基本概念 DOE 是用于帮助更有效地研究X 和Y 之间的关系，也即Y=f (x),其中y 为是响应值，也即实验 中的输出值，在细胞培养中可以是单细胞产率Pcd，也可以是质量，或者是活细胞密度VCD 。 x 也就是因子，即可能会对结果产生影响的因素。f (x)，模型，即是符合Y 和x 关系的方程式。 混料设计 试验者要通过试验得出各种成分比例与指标的关系。例如，某种不锈钢由铁、镍、铜、铬4 种元素组成，我们想知道每种元素所占比例与抗拉强度的数量关系。对于该类问题，研究的 是在整个产品中各个成分所占的比率问题，显然，这些比率的总和应该为 100%。研究这类 问题的实验设计称为混料设计。 案例研究 背景介绍 TM TM TM 在传统的培养基筛选中，发现Sartorius/Lonza 提供的PowerCHO 1，PowerCHO 2，ProCHO 4 三种培养基能得到较高产率的抗体，现采用混料设计来研究是否可以通过优化三种培养基的 混合比率，来进一步提高产率。 实验设计 本文中采用的DOE 软件为Umetrics 的MODDE (vesion 10) 。 第1 步 TM TM TM 输入x ，分别为x = ProCHO 4 ，x = PowerCHO 1，x =PowerCHO 2，取值范围均为0%-100%。 1 2 3 第2 步 输入y ，产率mg/ml 第3 步 选择MODDE 自动推荐的Modified Simplex cCentroid 模型，点击home 中的design wizard 按 钮产生工作表。在工作表中，第1 列Exp No 为默认的实验编号；第2 列Exp Name 为实验名 称，可以默认也可以自行命名；第3 列Run Order 为随机化的实验顺序；第4 列Incl/excl 可 以人为选着是否需要这一组实验，推荐默认，即全部为 Incl；第5-7 列为 Modified Simplex Centroid 模型的实验组合，在本案例中也就是不同的培养基比率的组合。其中，11-13 行为 中心点的3 个重复，以评估整个实验的可重复性。第8 列为实验输出，也即y 。 第4 步 根据以上工作表的组合以及顺序(Run Order)行实验，得出的Y 值填入工作表的第8 列。 第5 步 点击Home 中的Analysis Wizard 按钮，进行模型评估。在DOE 软件中，有大量的参数可以用 来评估或辅助评估模型，主要有Results Variation ，Response Distribution ，Significance of Terms，Residuals Normal Probability Plot，Obs