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ModFit中文手冊
4. 應用ModFit LT 軟體分析DNA 直方圖
4.1 概述
ModFit LT 是由美國 Verity Software House 公司設計 ,專門用於流式細胞術中進行細胞周
期分析的軟體 。它通過對DNA 含量直方圖進行曲線擬合,能快速計算出分析細胞周期各時相細
胞的含量、G1/S/G2+M 細胞的百分比 ,並測量腫瘤細胞的DNA 指數 (DNA Index) 、及析凋亡細
胞亞二倍體所占的比例 。此外 ,2.0 版本還增加了 “同步化分析”和 “增殖分析”的功能 ,可分
別進行同步化細胞和增殖細胞的研究 (Synchronized or Drug-Perturbed Cells) ,對於研究凋亡細胞
生物學與藥理的同仁 ,實為一大利器 。
本軟體有蘋果電腦與 PC Win98/NT 兩種版本 ,皆內建有 65 種數學模型 ,可彈性運用以
因應不同的 DNA直方圖分析 。從事直方圖分析時, ModiFit LT 軟體允許使用者應用四種基本方
式操作: (1) Automatic Analysis (2) Manual Analysis (3) Synchronization 精靈 (4) Proliferation 精
靈 。以下之範例練習可讓您熟悉 ModiFit LT 軟體的四種基本分析功能 ,我們將以四個已儲存之
數據檔案來練習 DNA 直方圖之分析 。這四個數據檔案之檔名及樣品資料如下 :
檔案名 樣品
SampleLM.FCS
4.2 自動分析
1. 從蘋果功能表下進入ModFit LT以啟動該軟體 ,並在隨後出現的對話方框上按 OK 。
ModFit LT軟體有一套 S期評估功能,可以依照您所制定的
範圍 ,評估該樣品中S Phase 比例是屬於少量、中度或多
量的 ,並在報告中顯示出可信度。軟體若還沒有被實驗室
其他人設置過 ,那麽當你進行分析時 ,將會出現一個關於
S期評估的詢問方框 ,提供了3 個選項:馬上設置S期的臨
界值;以後再提醒我設置S期的臨界值 ;不需要啟動S期評
估這項功能。若你需要這項評估 ,你必須輸入你們實驗室
獲得的具有統計意義的各種組織的二倍體或者異倍體的S期的臨界值 ,如沒有 ,則不必啟動
這項功能 。
暫時關閉 S-phase 評估功能
2. 從 Edit menu 指令板中選擇 S-Phase Cutoffs ,並將 Activate Assessment System 改成
,以取消S Phase評估功能 。軟體中雖有預設值 ,但各醫院醫檢師必須鍵入自定的範圍才
能有真實的評估功能 ,因此軟體一般
會在分析數據時,要求使用者”Entry
your own S-Phase cutoff.”。在此練習
中,我們先暫時關閉此一功能 。
3. 按 OK 表示接受此一選項 。
開啟一數據檔案
4. 在工具板中點擊 File 鈕以開啟檔
案 。並在隨後出現的 Open File 對話方框上尋找Sample1m.fcs 數據檔案 ,路徑
為 Mac HD:/BD Application:/ModFit folder ,快按兩下以開啟該檔案匣 。
5. 選擇該檔案匣中 SampleLM.fcs 數據檔案 ,並
選擇 Open 以載入此檔 。
6. 在 Choose Parameter For Analysis 對話方框
中選擇 FL2-A 為 DNA 參數 ,點擊 OK 。
7. 如果想要圈選單一細胞 ,點擊Define Gate 1 。
8. 在隨後出現的 Define Gate Parameter 對話方框中選用 FL2-W 為 X 參數項 ,FL2-A
為 Y 參數項。點擊 OK 。
9. 修改多角形區域以包含所有單一細胞 (參考下頁之範本)
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