上课用特殊染色和组织化学.ppt

特殊染色及组织化学 赣南医学院病理学教研室 第一节 特殊染色及组织化学的基本知识 一、染色方法 1863年由waldeyer率先倡导用苏木素染液染细胞核，后来Mallory、Mayer等也阐述过苏木素的应用。近年来特殊染色和组织化学方法也屡有创新。Shikata(1973)，Tanka等(1981年)分别介绍了用地依红和维多利亚蓝混合液显示乙型肝炎表面抗原的方法；1987年Crocker J等推出了核仁组成区嗜银蛋白染色的技术方法以及1991年进行的乳腺肿瘤核仁组成区的研究方法等。 二、染色目的 未加染色的任何组织切片在镜下只能辨认细胞和胞核的轮廓，看不清楚其他任何结构。染色的目的就是将组织切片浸入染色剂内，经过一定的时间，将组织或细胞及其他异常成分染上不同深浅的颜色，便于在光学显微镜下进行观察。 三、染色原理 染色过程是染色剂和组织细胞相结合的过程。其机理尚未完全清楚。 1、有学者认为从物理学角度看，染色剂和组织细胞的结合是“溶解”或“吸收”。例如苏丹类染色剂使脂质着色，就是利用染色剂在脂质中的溶解度大于在酒精等溶剂中的溶解度这一特性。有些染色剂是染色剂分子通过渗透和毛细血管作用而被吸收或沉淀到组织、细胞的小孔中去而着色的‘这种机制的染色是很少的。 2、另有学者认为染色是染色剂与组织、细胞之间的化学性结合。如显示含铁血黄素的普鲁士反应是最典型的例子。 但是，大量染色的化学反应并不象铁反应那样明确。大多数染色的原理至今仍未搞清楚，有些可能是物理性的，有些可能是化学性的，有些则可能2种机制都起作用。正因为人们对染色的原理还没有完全掌握，所以还不能很好地运用原理来控制它，在相当程度上需凭工作经验。 四、染色的分类 (一)普通染色 最广泛应用于常规制片的苏木素和伊红染色，又称为常规染色。 (二)特殊染色 1．定义 专门用于显示某些特定目的物的染色方法称为“特殊染色”，它又可以理解为“选择性染色”。 特殊染色对目的物的选择性是相对的。有些方法具有相对的特异性，如油红O等脂质染色，显阳性者可以肯定为脂质；有些则显示的是一类物质，如PAS呈阳性反应者有糖原、粘蛋白、网织纤维、软骨、阿米巴原虫、霉菌等许多物质和组织结构，并不能确定是哪一种具体成分。 所谓特殊染色的相对性，就是一种方法可以显示多种目的物，一种目的物可以用多种方法显示，其中有些方法可能呈阳性，而有些方法则呈阴性，这就需要我们拿捏多种方法，因为有时只有依靠多种方法才能确定所要确认的目标。 2.特殊染色的分类 特殊染色方法按照所染目的物进行分类，有结缔组织、肌肉组织、神经组织、脂类物质、糖类、色素、病理的内源性沉着物、病原微生物、内分泌物质、骨、血液及造血组织、核酸、酶类等。 3.特殊染色的命名 对于特染的命名至今尚无统一的规定，多数均按发明者的姓名命名，如van Geison染色等；有的则按所用染色剂命名，如甲基绿一派若宁染色、苏丹Ⅲ染色等；有的按目的物命名，如网织纤维染色；还有的采用混合命名，如试剂十人名等。 4．特殊染色的意义 1)显示在常规HE染色切片中不明显的目的物,如病变中霉菌数量较少时，应用Gridley染色就容易发现 2)可以区别胶原纤维和平滑肌，苏丹染色可区别脑浆内的脂肪变和水样变。 3)可以显示某些HE染色中不能看到的目的物。如网织纤维、星形细胞的突起、结核杆菌、螺旋杆菌等，都可用相应的特殊染色法显示。 因此，特殊染色是常规染色的必要补允，也是染色技术中不可缺少的组成部分。它在病理诊断中起着辅助作用。 五、组织化学的基本概念 组织化学是在形态学基础上研究细胞或组织中物质的化学组成、定位、定量及代谢状态的学科，是组织学与生物学及生物化学等的边缘科学，其目的是联系形态，化学成分和功能来了解组织或细胞的代谢变化。 目前有许多组织化学方法已划入特殊染色，划分特殊染色和组织化学无绝对界限。 六、方法和种类 1、化学方法 根据其化学反应的原理，在组织切片上生成沉淀，显示定位。 2、类化学方法 有少数方法的染色反应有特殊性，但机制不明。 3、物理方法 应用物质的物理学特性，如苏丹、油红染料易溶于脂类而使脂类染色。 七、操作掌握的要点 1．组织材料及时切片与染色，才能保持组织细胞良好的形态结构。 2．染色切片的判断，应把病变的形态、部位及相应的理论一起进行综合分析，可借助阴性及阳性对照，正确分析实验结果。 3．生成的反应产物必须在原位沉淀，着色深，且不溶，为细小沉淀或小结晶。能保证定位的精确性及稳定性，便于反复观察。 1.虽然形成