表3总大肠菌群mpn检数表.ppt

微生物检验方法实例 1.细菌总数（平皿计数法） 细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌落的总数。 （1）应用范围 1）本法适用于测定饮用水和水源水中的细菌总数。 2）所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。因此必须结合大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。 （2）原理 每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、PH、需氧性质）去满足其要求，才能分别地将各种细菌培养出来。在实际工作中，不可能做到。一般是根据测定要求而采用常用方法进行细菌总数的测定，所测定的结果，只包括在使用的条件下生长的细菌总数。 仪器 高压蒸汽灭菌器； 干热灭菌箱 恒温箱； 冰箱 放大镜； 试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等，置于干热灭菌箱中160℃灭菌2h。 培养基 成分： 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 10~20g 蒸馏水 100ml 制法 将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，过滤，分装于玻璃容器中，经121℃灭菌20min，储存于暗处备用。 步骤 生活饮用水 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营氧琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37℃恒温箱 水源水 以无菌操作方法吸取1ml充分混匀的水样，注入盛有9ml灭菌水的试管中，混匀成1：10稀释液。 吸取1：10的稀释液1ml注入盛有9ml灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。按同法依次稀释1：1000、1：10000稀释等备用。吸取不同浓度的稀释时必须更换吸管。 用灭菌吸管取2~3个适宜浓度的稀释1ml，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用水的检测步骤。 菌落计数及报告方法 作平皿菌落计数时，可用直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生产时，则不宜采用，而应以无片状菌落生产的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一般，而其余一半中菌落数分布又很不均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。 各种不同情况的计算方法 首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告之（见表11-3例1） 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30~300之间，则应按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2应报告两者的平均数，若大于2则报告其中较小的菌落总数（见表11-3例2、3）。 若所有稀释度的平均菌落数大于300，则应按稀释最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表11-3例4）。 若所有稀释度的平均菌落数均下于30，则应按稀释最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表11-3例5） 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表11-3例6）。 菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数表示（见表11-3“报告方式栏”）。在报告菌落数为“无法计数”时应注明水样的稀释倍数。 表5-1 稀释度选择及菌落数报告方式 2.总大肠菌群 在饮用水的微分物安全监测中，普遍采用正常的肠道细菌为粪便污染指标，而不是直接测定肠道致病菌。 总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的。37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。总大肠菌群数系指所含有的总大肠菌群的数目。 总大肠菌数可用多管发酵法或滤膜法检验。 （1）多管发酵法 1）应用范围 ①本法适用于饮水用、水源水。特别是混浊度含量高的水质中的大肠菌群的测定。 ②水样中总大肠菌群的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能性。 2）原理 根据总大肠菌群应具有的生物特性，如革兰氏阴性无芽胞杆菌，在37℃24h内能发酵乳糖产气，能在选择性培养上产生典型菌落。 3）仪器 ①显微镜 ②革兰氏染色用有关器材。 ③其他仪器同细菌总数。 培养基 乳糖蛋白胨培养液 成分 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳糖 5g 氯化钠 5g 1.6%溴化钾乙醇溶液 蒸馏